CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.2.6. Điều chế phức itraconazol-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (ITZ-HPβCD)
CYCLODEXTRIN (ITZ-HPβCD)
2.2.6.1. Xây dựng qui trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HPβCD Chuẩn bị mẫu:
Mẫu chuẩn: cân chính xác khoảng 5 mg itraconazol chuẩn, cho vào bình định mức 50 ml,
thêm 0,5 ml dimethylformamid, lắc đều, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N, lắc đều đến khi tan hoàn toàn, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ khoảng 100 μg/ml).
Mẫu thử: cân chính xác một lƣợng phức ITZ-HPβCD tƣơng ứng với khoảng 50 mg itz
cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nƣớc cất nóng, lắc đều đến khi phức tan hết, để nguội, thêm nƣớc cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều (dung dịch có nồng độ qui về itraconazol khoảng 100 μg/ml).
Dung dịch HPβCD: cân chính xác khoảng 209,4 mg HPβCD (tƣơng ứng với lƣợng phức
ITZ-HPβCD chứa khoảng 50 mg itraconazol), cho vào bình định mức 10 ml, thêm 7 ml nƣớc cất nóng, lắc đều đến khi tan hết, để nguội, thêm nƣớc cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 μm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều.
Mẫu kiểm tra: cân chính xác khoảng 50 mg itraconazol chuẩn, cho vào bình định mức 10
ml, thêm 7 ml nƣớc cất nóng, lắc đều, để nguội, thêm nƣớc cất đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Lấy chính xác 1 ml dịch lọc trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm 35 ml dung dịch HCl 0,1 N, lắc đều, thêm 0,5 ml dimethylformamid, thêm dung dịch HCl 0,1 N đến vạch, lắc đều.
Tiến hành: đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn, mẫu thử, dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra
tại bƣớc sóng 254 nm, dùng dung dịch HCl 0,1 N có chứa 1% dimethylformamid làm mẫu trắng. Phép thử chỉ có giá trị khi độ hấp thụ của mẫu kiểm tra và dung dịch HPβCD tại bƣớc sóng 254 nm phải nằm trong khoảng ± 0,001.
Đánh giá qui trình: tính chọn lọc, khoảng tuyến tính, độ chính xác: tiến hành tƣơng tự
nhƣ mục 2.2.3.1
2.2.6.2. Xác định ảnh hƣởng của HPβCD đến độ tan của itz
Pha hòa tan: cho lƣợng dƣ itz (1 g) vào dãy dung dịch HPβCD có thể tích 50 ml, nồng
độ tăng dần 0 mmol, 10 mmol, 20 mmol, 30 mmol, 40 mmol khuấy hồi lƣu 400 vòng/phút trong 60 phút, để ổn định trong 24 giờ, lọc hỗn hợp qua màng lọc 0,45 μm. Pha loãng dịch lọc bằng dung dịch HCl 0,1 N đến nồng độ thích hợp, đo phổ UV ở bƣớc sóng 254 nm. Dựa vào đồ thị pha hòa tan đánh giá ảnh hƣởng của HPβCD đến độ tan của itz.
2.2.6.3. Xác định tỷ lệ tạo phức giữa itz và HPβCD
Tỷ lệ tạo phức giữa itz và HPβCD đƣợc ngoại suy từ đồ thị pha hòa tan.
2.2.6.4. Điều chế phức ITZ-HPβCD
Phƣơng pháp nghiền ƣớt: cân itz và HPβCD theo tỷ lệ mol đã đƣợc xác định, nghiền
trộn đều trong cối sứ, thêm ethanol 96o vào hỗn hợp, nghiền trộn trong 60 phút tạo thành khối nhão. Sấy hỗn hợp ở 40 oC dƣới áp suất giảm đến khối lƣợng không đổi.
Phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi: cân itz, HPβCD, trộn đều thành hỗn hợp bột, cho
vào bình cầu, thêm ethanol 96o vào, khuấy hồi lƣu, thêm từng giọt acid HCl 0,1 M đến khi dung dịch trong suốt, khuấy hồi lƣu 400 vòng/phút ở nhiệt độ phòng trong 6 giờ. Dung dịch đƣợc cô thu hồi ethanol ở nhiệt độ 40 oC dƣới áp suất giảm, cắn sấy ở 40 o
C dƣới áp suất giảm đến độ ẩm qui định.
2.2.6.5. Đánh giá phức ITZ-HPβCD Thử độ hòa tan:
Tiến hành trên máy thử độ hịa tan kiểu cánh khuấy. Mơi trƣờng: 900 ml dung dịch HCl 0,1 N, nhiệt độ: 37 ± 0,5 oC, tốc độ khuấy: 50 vòng/phút. Tiến hành tƣơng tự nhƣ mục 2.2.3.5
Thử độ tan: cho 2,5 g itz (dƣ) hay lƣợng phức ITZ-HPβCD tƣơng ứng với 2,5 g itz vào
bình nón nút mài chứa 100 ml HCl 0,1 N. Lắc trên máy lắc rung 100 vòng/phút trong 36 giờ, lọc hỗn hợp qua màng lọc 0,45 μm. Pha loãng dịch lọc bằng dung dịch HCl 0,1 N đến nồng độ thích hợp. Đo độ hấp thụ UV ở bƣớc sóng 254 nm, xác định độ tan của itz và phức ITZ-HPβCD.
Phổ IR, phổ DSC: tiến hành tƣơng tự nhƣ mục 2.2.3.5.
Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (1H-NMR): 1H-NMR của itz và phức ITZ-HPβCD đƣợc đo trong dung môi DMSO, tần số đo 500 MHz, T = 300 K.
2.2.6.6. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở phức ITZ-HPβCD: gồm các chỉ tiêu về tính chất,
định tính, giảm khối lƣợng do làm khơ, kim loại nặng, cắn sau khi nung, độ tinh khiết, giới hạn nhiễm khuẩn.
2.2.6.7. Xây dựng qui trình điều chế phức ITZ-HPβCD