Biểu đồ pha hòa tan của itz trong dung dịch HPβCD ở khoảng nồng độ của dung dịch HPβCD từ 0 mmol đến 40 mmol có dạng AP. Sự tƣơng quan giữa nồng độ itz và nồng độ HPβCD là phƣơng trình bậc 2 với hệ số tƣơng quan bậc 2: R2 = 0,9999, biểu đồ là một đƣờng cong parabol. Từ biểu đồ pha hòa tan cho thấy với cùng một lƣợng itz, độ tan của itz tăng theo sự gia tăng nồng độ HPβCD.
3.6.3. Xác định tỷ lệ tạo phức giữa itz và HPβCD
Biểu đồ pha hịa tan của itz theo HPβCD có dạng Ap, biểu thị bằng phƣơng trình bậc hai, tỷ lệ tạo phức giữa itz và HPβCD là 1 : 1; 1 : 2 và 1 : 3.
3.6.4. Điều chế phức ITZ-HPβCD: dùng HPβCD có độ thế 5,91 điều chế 3 lô theo tỷ lệ
hơi dung môi. Phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi tiến hành theo qui trình đã xây dựng ở phụ lục 26.
3.6.5. Đánh giá phức ITZ-HPβCD 3.6.5.1. Thử độ hòa tan
Bảng 3.41. Độ hòa tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp
nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (n = 6).
Thời gian (phút)
% itz hòa tan
5 10 15 20 30 45 60 itz 1,87 2,06 2,75 3,13 3,65 4,04 5,04 ± 0,004 ± 0,003 ± 0,007 ± 0,004 ± 0,006 ± 0,005 ± 0,003 ITZ-HPβCD nghiền ƣớt 18,25 18,80 18,83 18,83 18,89 18,92 19,38 ± 0,02 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,04 ± 0,02 ± 0,03 ITZ-HPβCD đồng bay hơi (1 : 1) 47,74 59,33 64,10 68,91 70,93 74,39 75,46 ± 0,07 ± 0,05 ± 0,06 ± 0,03 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,02 ITZ-HPβCD đồng bay hơi (1 : 2) 79,65 81,96 83,71 85,90 89,09 91,60 93,28 ± 0,06 ± 0,05 ± 0,02 ± 0,04 ± 0,02 ± 0,03 ± 0,05 ITZ-HPβCD đồng bay hơi (1 : 3) 92,03 95,42 97,44 97,53 97,74 97,81 97,87 ± 0,04 ± 0,03 ± 0,02 ± 0,04 ± 0,07 ± 0,03 ± 0,06
Biểu đồ 3.19. Độ hòa tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng
pháp nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (iHP: phức ITZ-HPβCD).
Độ hòa tan của phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi cao hơn phƣơng pháp nghiền ƣớt ở tất cả các tỷ lệ mol và khác nhau có ý nghĩa (P < 0,05) nên dùng phức này để thử tiếp độ tan.
3.6.5.2. Thử độ tan
Bảng 3.42. Độ tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp
đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (n = 3).
Công thức Độ tan bão hòa (mg/ml)
Itz 10-6
Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 1 0,73 ± 0,002 Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 2 1,48 ± 0,004 Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 3 14,65 ± 0,007
Biểu đồ 3.20. Độ tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp
đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau.
Phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung mơi có độ hịa tan, độ tan cao hơn phƣơng pháp nghiền ƣớt. Phức ở tỷ lệ mol 1 : 3 có độ tan rất cao, tuy nhiên phức này cũng làm tăng khối lƣợng của liều thuốc sử dụng lên q lớn do đó nó chỉ thích hợp làm ngun liệu để điều chế các dạng thuốc lỏng. Phức ở tỷ lệ mol 1 : 2 phù hợp về
khối lƣợng để ứng dụng vào các dạng thuốc viên dùng đƣờng uống nên dùng phức này để làm các thử nghiệm tiếp theo.
3.6.5.3. Phổ hồng ngoại (IR): (phụ lục 10, hình PL.10.1 và PL.10.2) Bảng 3.43. Biện giải phổ IR của itz, HPβCD và phức ITZ-HPβCD
Phổ IR của phức ITZ-HPβCD có sự di chuyển và giảm cƣờng độ các đỉnh của liên kết C=O, C=N, C-N, vịng thơm, từ đó có thể kết luận phân tử itz có nhiều trung tâm tƣơng tác với HPβCD.
3.6.5.4. Phổ DSC: phổ DSC của itz có 1 đỉnh thu nhiệt đặc trƣng ở 167,52 oC. Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ 1 : 2 có 1 đỉnh thu nhiệt ở 166,38 oC khơng cịn đặc trƣng nhƣ itz tự do,
kết quả này cho thấy itz đã tƣơng tác với HPβCD, (phụ lục 10, hình PL.10.3).
3.6.5.5. Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (1H-NMR): chứng minh sự tạo phức giữa itz và
HPβCD là rõ ràng, (phụ lục 10, hình PL.10.4 và PL.10.5). Từ kết quả phân tích phổ 1H-NMR của phức ITZ-HPβCD (bảng 4.13) có thể đƣa ra cấu trúc dự đốn của phức bao
giữa itz và HPβCD đƣợc thể hiện trong hình 3.4.
Nhóm chức Đỉnh hấp thụ (cm -1) Itz HPβCD Phức ITZ-HPβCD O-H 3384,8 3480,0 C-H 2929,7 2929,7 C-O 1031,8 1033,8 C=O 1697,2 1708,8 Vòng thơm 1510,2; 1450,4 1514,0; 1460,0 C=N, C-N 1450,4 1460,0 CH3 1228,6; 1380,9 1380,9
Hình 3.4. Cấu trúc dự đốn của phức bao giữa itz và HPβCD theo tỷ lệ mol 1 : 1 (a); 1 : 2
(b) và 1 : 3 (c).
3.6.6. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở phức itraconazol-hydroxypropyl-β-cyclodextrin:
phụ lục 19.
3.6.7. Xây dựng qui trình điều chế phức itraconazol-hydroxypropyl-β-cyclodextrin:
phụ lục 26.
3.7. ĐIỀU CHẾ PHỨC ITRACONAZOL-HYDROXYBUTYL-β-CYCLODEXTRIN (ITZ-HBβCD) (ITZ-HBβCD)
3.7.1. Thẩm định qui trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HBβCD: (phụ lục 11) Tính chọn lọc: mẫu thử có phổ hấp thụ UV và bƣớc sóng hấp thụ cực đại (254 ± 1 nm)
Dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra khơng có bƣớc sóng hấp thụ cực đại tại 254 ± 1 nm. Độ hấp thụ của dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra tại bƣớc sóng hấp thụ cực đại 254 ± 1 nm nằm trong khoảng ± 0,001.
Phƣơng pháp đo phổ UV định lƣợng itz trong phức ITZ-HBβCD đạt tính chọn lọc, (phụ lục 11, hình PL.11.1).
Khoảng tuyến tính: (phụ lục 9 mục 9.2)
Độ chính xác: quy trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HBβCD bằng phƣơng pháp đo phổ UV đạt độ chính xác với RSD < 2%
3.7.2. Xác định ảnh hƣởng của HBβCD đến độ tan của itz: pha hòa tan
Bảng 3.44. Độ tan của itz trong dung dịch HBβCD nồng độ từ 0 - 40 mmol, (n = 3)
Nồng độ HBβCD (mmol) 0 10 20 30 40
Độ hấp thụ (254 nm) 0,241 0,136 0,351 0,603 0,907 ± 0,001 ± 0,003 ± 0,002 ± 0,003 ± 0,002 itz hòa tan (mmol) 0,011 0,327 0,816 1,390 2,083
± 0,0003 ± 0,002 ± 0,004 ± 0,003 ± 0,002 (Nồng độ HBβCD ở 0 mmol khơng pha lỗng, từ nồng độ 10 – 40 mmol pha loãng 50 lần khi đo phổ UV)