Nhóm chức Đỉnh hấp thụ (cm-1) Rutin HBβCD Phức R-HBβCD OH 3384,8 3386,8 3384,8 C-H 2908,5 2933,5 2931,6 C-O 1029,9 1029,9 C=O 1654,4 1654,8 Vòng phenyl 1598,9; 1504,4; 1458,1 1604,7; 1458,1 =C-O-C 1296,1 1298,0
Phổ IR của phức R-HBβCD có sự di chuyển và giảm cƣờng độ của vòng phenyl và liên kết =C-O-C của vịng C của rutin, từ đó có thể kết luận vòng phynyl của rutin đã tƣơng tác với khoang HBβCD.
3.4.5.4. Phổ DSC: (phụ lục 8, hình PL.8.2)
Phổ DSC của rutin có một đỉnh nội nhiệt ở 177,01 oC, tƣơng ứng với điểm nóng chảy của rutin. Phổ DSC của HBβCD có đỉnh nội nhiệt ở 156,33 oC, tƣơng ứng với sự mất nƣớc. Phổ DSC của phức R-HBβCD có đỉnh nội nhiệt ở 164,75 oC. So với phổ DSC của rutin ban đầu, đỉnh nội nhiệt của rutin trong phức bị dịch chuyển về vùng nhiệt độ thấp hơn và có cƣờng độ bị giảm bớt. Điều này chứng tỏ có sự thay đổi trạng thái của rutin.
3.4.5.5. Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (1
H-NMR): (phụ lục 8, hình PL.8.3), khẳng định
vịng B của rutin đã liên kết với HBβCD thơng qua liên kết phối trí và phức R-HBβCD đã đƣợc hình thành. Từ kết quả phân tích phổ 1
H-NMR (bảng 4.11 và bảng 4.12) có thể đƣa ra cấu trúc dự đốn của phức bao giữa rutin và HBβCD tƣơng tự nhƣ trong hình 3.3 mục 3.3.5.5.
3.4.6. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở phức rutin-hydroxybutyl-β-cyclodextrin: phụ lục
18.
3.4.7. Xây dựng qui trình điều chế phức rutin-hydroxybutyl-β-cyclodextrin: phụ lục
25.
3.5. SO SÁNH ĐỘ HÕA TAN, ĐỘ TAN CỦA RUTIN TRONG PHỨC R-HBβCD VÀ RUTIN TRONG PHỨC R-HPβCD
3.5.1. So sánh độ hòa tan của rutin trong phức R-HBβCD và rutin trong phức R-HPβCD
Bảng 3.38. So sánh độ hòa tan của rutin trong phức R-HBβCD và rutin trong phức
R-HPβCD
Thời gian (phút)
% rutin hòa tan
5 10 15 20 30 45 60 Rutin 38,81 43,55 45,66 47,90 49,70 52,68 54,87 Nghiền ƣớt R-HBβCD 49,06 58,46 60,85 64,89 65,24 72,58 79,06 R-HPβCD 54,87 55,98 60,55 61,33 61,33 69,19 76,68 Đồng bay hơi R-HBβCD 75,27 80,30 86,20 90,98 95,81 98,34 98,57 R-HPβCD 73,88 79,12 83,72 89,06 93,40 95,56 96,11
Biểu đồ 3.16. So sánh độ hòa tan của rutin trong phức R-HBβCD và rutin trong phức
R-HPβCD, (R-HP: phức R-HPβCD; R-HB: phức R-HBβCD).
Trong 2 phƣơng pháp điều chế, độ hòa tan của rutin trong phức R-HBβCD cao hơn rutin trong phức R-HPβCD ở tất cả các thời điểm lấy mẫu, khác nhau khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05)
3.5.2. So sánh độ tan của rutin trong phức R-HBβCD và rutin trong phức R-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi
Bảng 3.39. So sánh độ tan của rutin trong phức R-HBβCD và rutin trong phức R-HPβCD
điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi
Công thức Độ tan bão hòa (mg/ml) Phức R-HBβCD 0,607 ± 0,003 Phức R-HPβCD 0,459 ± 0,002 Tăng (lần) 1,32
Biểu đồ 3.17. So sánh độ tan của rutin trong phức R-HBβCD và rutin trong phức
R-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi.
Độ tan của rutin trong phức R-HBβCD cao hơn rutin trong phức R-HPβCD 1,32 lần
3.6. ĐIỀU CHẾ PHỨC ITRACONAZOL-HYDROXYPROPYL-β-CYCLODEXTRIN (ITZ-HPβCD) CYCLODEXTRIN (ITZ-HPβCD)
3.6.1. Thẩm định qui trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HPβCD: (phụ lục 9)
Tính chọn lọc: mẫu thử có phổ hấp thụ UV và bƣớc sóng hấp thụ cực đại (254 ± 1 nm)
giống mẫu chuẩn.
Dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra khơng có bƣớc sóng hấp thụ cực đại tại 254 ± 1 nm. Độ hấp thụ của dung dịch HPβCD và mẫu kiểm tra tại bƣớc sóng hấp thụ cực đại 254 ± 1 nm nằm trong khoảng ± 0,001.
Phƣơng pháp đo phổ UV định lƣợng itz trong phức ITZ-HPβCD đạt tính chọn lọc, (phụ lục 9, hình PL.9.1)
Khoảng tuyến tính: phƣơng trình hồi qui tuyến tính: ŷ = 0,0311x - 0,0075 với R2 = 0,9999. Phƣơng trình tƣơng thích, hệ số B, B0 có ý nghĩa.
Độ chính xác: quy trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HPβCD bằng phƣơng pháp đo
3.6.2. Xác định ảnh hƣởng của HPβCD đến độ tan của itz: pha hòa tan
Bảng 3.40. Độ tan của itz trong dung dịch HPβCD nồng độ từ 0 - 40 mmol (n = 3).
Nồng độ HPβCD (mmol) 0 10 20 30 40
Độ hấp thụ (254 nm) 0,239 0,141 0,322 0,532 0,762 ± 0,002 ± 0,001 ± 0,004 ± 0,003 ± 0,002 Itz hòa tan (mmol) 0,011 0,338 0,750 1,229 1,752
± 0,0007 ± 0,002 ± 0,005 ± 0,004 ± 0,003 (Nồng độ HPβCD ở 0 mmol khơng pha lỗng, từ nồng độ 10 – 40 mmol pha loãng 50 lần khi đo phổ UV)
Biểu đồ 3.18. Pha hòa tan của itz theo HPβCD
Biểu đồ pha hòa tan của itz trong dung dịch HPβCD ở khoảng nồng độ của dung dịch HPβCD từ 0 mmol đến 40 mmol có dạng AP. Sự tƣơng quan giữa nồng độ itz và nồng độ HPβCD là phƣơng trình bậc 2 với hệ số tƣơng quan bậc 2: R2 = 0,9999, biểu đồ là một đƣờng cong parabol. Từ biểu đồ pha hòa tan cho thấy với cùng một lƣợng itz, độ tan của itz tăng theo sự gia tăng nồng độ HPβCD.
3.6.3. Xác định tỷ lệ tạo phức giữa itz và HPβCD
Biểu đồ pha hịa tan của itz theo HPβCD có dạng Ap, biểu thị bằng phƣơng trình bậc hai, tỷ lệ tạo phức giữa itz và HPβCD là 1 : 1; 1 : 2 và 1 : 3.
3.6.4. Điều chế phức ITZ-HPβCD: dùng HPβCD có độ thế 5,91 điều chế 3 lô theo tỷ lệ
hơi dung môi. Phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi tiến hành theo qui trình đã xây dựng ở phụ lục 26.
3.6.5. Đánh giá phức ITZ-HPβCD 3.6.5.1. Thử độ hòa tan
Bảng 3.41. Độ hòa tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp
nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (n = 6).
Thời gian (phút)
% itz hòa tan
5 10 15 20 30 45 60 itz 1,87 2,06 2,75 3,13 3,65 4,04 5,04 ± 0,004 ± 0,003 ± 0,007 ± 0,004 ± 0,006 ± 0,005 ± 0,003 ITZ-HPβCD nghiền ƣớt 18,25 18,80 18,83 18,83 18,89 18,92 19,38 ± 0,02 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,04 ± 0,02 ± 0,03 ITZ-HPβCD đồng bay hơi (1 : 1) 47,74 59,33 64,10 68,91 70,93 74,39 75,46 ± 0,07 ± 0,05 ± 0,06 ± 0,03 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,02 ITZ-HPβCD đồng bay hơi (1 : 2) 79,65 81,96 83,71 85,90 89,09 91,60 93,28 ± 0,06 ± 0,05 ± 0,02 ± 0,04 ± 0,02 ± 0,03 ± 0,05 ITZ-HPβCD đồng bay hơi (1 : 3) 92,03 95,42 97,44 97,53 97,74 97,81 97,87 ± 0,04 ± 0,03 ± 0,02 ± 0,04 ± 0,07 ± 0,03 ± 0,06
Biểu đồ 3.19. Độ hòa tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng
pháp nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (iHP: phức ITZ-HPβCD).
Độ hòa tan của phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi cao hơn phƣơng pháp nghiền ƣớt ở tất cả các tỷ lệ mol và khác nhau có ý nghĩa (P < 0,05) nên dùng phức này để thử tiếp độ tan.
3.6.5.2. Thử độ tan
Bảng 3.42. Độ tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp
đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (n = 3).
Công thức Độ tan bão hòa (mg/ml)
Itz 10-6
Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 1 0,73 ± 0,002 Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 2 1,48 ± 0,004 Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ mol 1 : 3 14,65 ± 0,007
Biểu đồ 3.20. Độ tan của itz và itz trong phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp
đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau.
Phức ITZ-HPβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung mơi có độ hịa tan, độ tan cao hơn phƣơng pháp nghiền ƣớt. Phức ở tỷ lệ mol 1 : 3 có độ tan rất cao, tuy nhiên phức này cũng làm tăng khối lƣợng của liều thuốc sử dụng lên q lớn do đó nó chỉ thích hợp làm ngun liệu để điều chế các dạng thuốc lỏng. Phức ở tỷ lệ mol 1 : 2 phù hợp về
khối lƣợng để ứng dụng vào các dạng thuốc viên dùng đƣờng uống nên dùng phức này để làm các thử nghiệm tiếp theo.
3.6.5.3. Phổ hồng ngoại (IR): (phụ lục 10, hình PL.10.1 và PL.10.2) Bảng 3.43. Biện giải phổ IR của itz, HPβCD và phức ITZ-HPβCD
Phổ IR của phức ITZ-HPβCD có sự di chuyển và giảm cƣờng độ các đỉnh của liên kết C=O, C=N, C-N, vịng thơm, từ đó có thể kết luận phân tử itz có nhiều trung tâm tƣơng tác với HPβCD.
3.6.5.4. Phổ DSC: phổ DSC của itz có 1 đỉnh thu nhiệt đặc trƣng ở 167,52 oC. Phức ITZ-HPβCD tỷ lệ 1 : 2 có 1 đỉnh thu nhiệt ở 166,38 oC khơng cịn đặc trƣng nhƣ itz tự do,
kết quả này cho thấy itz đã tƣơng tác với HPβCD, (phụ lục 10, hình PL.10.3).
3.6.5.5. Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (1H-NMR): chứng minh sự tạo phức giữa itz và
HPβCD là rõ ràng, (phụ lục 10, hình PL.10.4 và PL.10.5). Từ kết quả phân tích phổ 1H-NMR của phức ITZ-HPβCD (bảng 4.13) có thể đƣa ra cấu trúc dự đốn của phức bao
giữa itz và HPβCD đƣợc thể hiện trong hình 3.4.
Nhóm chức Đỉnh hấp thụ (cm -1) Itz HPβCD Phức ITZ-HPβCD O-H 3384,8 3480,0 C-H 2929,7 2929,7 C-O 1031,8 1033,8 C=O 1697,2 1708,8 Vòng thơm 1510,2; 1450,4 1514,0; 1460,0 C=N, C-N 1450,4 1460,0 CH3 1228,6; 1380,9 1380,9
Hình 3.4. Cấu trúc dự đốn của phức bao giữa itz và HPβCD theo tỷ lệ mol 1 : 1 (a); 1 : 2
(b) và 1 : 3 (c).
3.6.6. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở phức itraconazol-hydroxypropyl-β-cyclodextrin:
phụ lục 19.
3.6.7. Xây dựng qui trình điều chế phức itraconazol-hydroxypropyl-β-cyclodextrin:
phụ lục 26.
3.7. ĐIỀU CHẾ PHỨC ITRACONAZOL-HYDROXYBUTYL-β-CYCLODEXTRIN (ITZ-HBβCD) (ITZ-HBβCD)
3.7.1. Thẩm định qui trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HBβCD: (phụ lục 11) Tính chọn lọc: mẫu thử có phổ hấp thụ UV và bƣớc sóng hấp thụ cực đại (254 ± 1 nm)
Dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra khơng có bƣớc sóng hấp thụ cực đại tại 254 ± 1 nm. Độ hấp thụ của dung dịch HBβCD và mẫu kiểm tra tại bƣớc sóng hấp thụ cực đại 254 ± 1 nm nằm trong khoảng ± 0,001.
Phƣơng pháp đo phổ UV định lƣợng itz trong phức ITZ-HBβCD đạt tính chọn lọc, (phụ lục 11, hình PL.11.1).
Khoảng tuyến tính: (phụ lục 9 mục 9.2)
Độ chính xác: quy trình định lƣợng itz trong phức ITZ-HBβCD bằng phƣơng pháp đo phổ UV đạt độ chính xác với RSD < 2%
3.7.2. Xác định ảnh hƣởng của HBβCD đến độ tan của itz: pha hòa tan
Bảng 3.44. Độ tan của itz trong dung dịch HBβCD nồng độ từ 0 - 40 mmol, (n = 3)
Nồng độ HBβCD (mmol) 0 10 20 30 40
Độ hấp thụ (254 nm) 0,241 0,136 0,351 0,603 0,907 ± 0,001 ± 0,003 ± 0,002 ± 0,003 ± 0,002 itz hòa tan (mmol) 0,011 0,327 0,816 1,390 2,083
± 0,0003 ± 0,002 ± 0,004 ± 0,003 ± 0,002 (Nồng độ HBβCD ở 0 mmol khơng pha lỗng, từ nồng độ 10 – 40 mmol pha loãng 50 lần khi đo phổ UV)
Biểu đồ 3.21. Pha hòa tan của itz theo HBβCD.
Biểu đồ pha hòa tan của itz trong dung dịch HBβCD ở khoảng nồng độ của dung dịch HBβCD từ 0 mmol đến 40 mmol có dạng AP. Sự tƣơng quan giữa nồng độ itz và nồng độ HBβCD là phƣơng trình bậc 2 với hệ số tƣơng quan bậc 2: R2 = 0,9998. Biểu đồ là 1
đƣờng cong parabol. Từ biểu đồ pha hòa tan cho thấy với cùng một lƣợng itz, độ tan của itz tăng theo sự gia tăng nồng độ HBβCD.
3.7.3. Xác định tỷ lệ tạo phức giữa itz và HBβCD: ngoại suy từ biểu đồ pha hòa tan, itz
tạo phức với HBβCD theo tỷ lệ mol 1 : 1; 1 : 2 và 1 : 3.
3.7.4. Điều chế phức ITZ-HBβCD: dùng HBβCD có độ thế 5,54 điều chế 3 lơ theo tỷ lệ
mol giữa itz và HBβCD là 1 : 1; 1 : 2 và 1 : 3 bằng phƣơng pháp nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi. Phƣơng pháp đồng bay hơi dung mơi tiến hành theo qui trình đã xây dựng ở phụ lục 27.
3.7.5. Đánh giá phức ITZ-HBβCD 3.7.5.1. Thử độ hòa tan
Bảng 3.45. Độ hòa tan của itz và itz trong phức ITZ-HBβCD điều chế bằng phƣơng pháp
nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (n = 6)
Thời gian (phút)
% itz hòa tan
5 10 15 20 30 45 60 itz 1,87 2,06 2,75 3,13 3,65 4,04 5,04 ± 0,004 ± 0,003 ± 0,007 ± 0,004 ± 0,006 ± 0,005 ± 0,003 ITZ-HBβCD nghiền ƣớt 18,25 18,80 18,86 18,95 18,98 19,09 19,38 ± 0,03 ± 0,01 ± 0,03 ± 0,02 ± 0,01 ± 0,04 ± 0,01 ITZ-HBβCD đồng bay hơi (1 : 1) 62,00 67,47 68,50 71,70 73,78 75,29 77,82 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,07 ± 0,02 ± 0,04 ± 0,05 ± 0,06 ITZ-HBβCD đồng bay hơi (1 : 2) 82,88 84,80 86,88 89,69 90,51 92,62 96,60 ± 0,08 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,07 ± 0,09 ± 0,07 ± 0,07 ITZ-HBβCD đồng bay hơi (1 : 3) 95,32 95,53 98,41 98,64 98,99 98,92 99,12 ± 0,05 ± 0,02 ± 0,06 ± 0,05 ± 0,07 ± 0,04 ± 0,05
Biểu đồ 3.22. Độ hòa tan của itz và itz trong phức ITZ-HBβCD điều chế bằng phƣơng
pháp nghiền ƣớt và đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau, (iHB: phức ITZ-HBβCD).
Độ hòa tan của phức ITZ-HBβCD điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi cao hơn phƣơng pháp nghiền ƣớt ở tất cả các tỷ lệ mol và các thời điểm lấy mẫu và khác nhau có ý nghĩa (P < 0,05) nên dùng phức này để thử tiếp độ tan.
3.7.5.2. Thử độ tan
Bảng 3.46. Độ tan của itz và itz trong phức ITZ-HBβCD điều chế bằng phƣơng pháp
đồng bay hơi dung môi, (n = 3).
Cơng thức Độ tan bão hịa (mg/ml)
Itz 10-6
Phức ITZ-HBβCD tỷ lệ mol 1 : 1 1,27 ± 0,003 Phức ITZ-HBβCD tỷ lệ mol 1 : 2 3,30 ± 0,005 Phức ITZ-HBβCD tỷ lệ mol 1 : 3 20,85 ± 0,04
Biểu đồ 3.23. Độ tan của itz và itz trong phức ITZ-HBβCD điều chế bằng phƣơng pháp
đồng bay hơi dung môi với các tỷ lệ mol khác nhau.
Phức ITZ-HBβCD tỷ lệ mol 1 : 2 điều chế bằng phƣơng pháp đồng bay hơi dung môi đạt yêu cầu về độ hòa tan, độ tan và phù hợp về khối lƣợng để ứng dụng vào các dạng thuốc rắn nên dùng phức này để thử nghiệm tiếp theo xác định bản chất phức.
3.7.5.3. Phổ hồng ngoại (IR): (phụ lục 12, hình PL.12.1)
Bảng 3.47. Biện giải phổ IR của itz, HBβCD và phức ITZ-HBβCD
Nhóm chức Đỉnh hấp thụ (cm-1) Itz HBβCD Phức ITZ-HBβCD O-H 3386,8 3406,1 C-H 2933,5 2933,5 C-O 1029,9 1029,9 C=O 1697,2 1691,5 Vòng thơm 1510,2; 1450,4 1517,9 C=N, C-N 1450,4 1460,0 CH3 1228,6; 1380,9 1299,9
Các đỉnh đặc trƣng của itz bị mất hoặc biến dạng hoàn toàn trong phức ITZ-HBβCD chứng tỏ itz đã tƣơng tác rất mạnh với HBβCD.
3.7.5.4. Phổ DSC: (phụ lục 12, hình PL.12.2)
Phổ DSC của itz có 1 đỉnh thu nhiệt đặc trƣng ở 167,52 oC, HBβCD có 1 đỉnh thu nhiệt rộng ở 156,33 oC tƣơng ứng với quá trình mất nƣớc của HBβCD, phức ITZ-HBβCD tỷ lệ mol 1 : 2 có 1 đỉnh thu nhiệt ở 166,29 oC khơng cịn đặc trƣng nhƣ itz tự do, kết quả này cho thấy itz đã tƣơng tác với HBβCD.
3.7.5.5. Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (1H-NMR): (phụ lục 12, hình PL.12.3 và bảng 4.14)
Phổ 1H-NMR đã chứng minh sự tạo phức giữa itz và HBβCD bằng liên kết phối trí là rõ ràng. Từ kết quả phân tích phổ 1H-NMR của phức ITZ-HBβCD (bảng 4.14) có thể đƣa ra cấu trúc dự đoán của phức bao giữa itz và HBβCD tƣơng tự nhƣ hình 3.4 mục 3.6.5.5.
3.7.6. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở phức itraconazol-hydroxybutyl-β-cyclodextrin: phụ
lục 20.
3.7.7. Xây dựng qui trình điều chế phức itraconazol-hydroxybutyl-β-cyclodextrin:
phụ lục 27.
3.8. SO SÁNH ĐỘ HÕA TAN, ĐỘ TAN CỦA ITZ TRONG PHỨC ITZ-HBβCD VÀ ITZ TRONG PHỨC ITZ-HPβCD
3.8.1. So sánh độ hòa tan của itz trong phức ITZ-HBβCD và itz trong phức ITZ- HPβCD
Bảng 3.48. So sánh độ hòa tan của itz trong phức ITZ-HBβCD và itz trong phức ITZ-HPβCD
Thời gian (phút)
% itz hòa tan
5 10 15 20 30 45 60 itz 1,87 2,06 2,75 3,13 3,65 4,04 5,04 Nghiền ƣớt ITZ-HBβCD 18,25 18,80 18,86 18,95 18,98 19,09 19,38 ITZ-HPβCD 18,25 18,80 18,83 18,83 18,89 18,92 19,38 Đồng bay hơi dung môi 1:1 ITZ-HBβCD 62,00 67,47 68,50 71,70 73,78 75,29 77,82 ITZ-HPβCD 47,74 59,33 64,10 68,91 70,93 74,39 75,46 1:2 ITZ-HBβCD 82,88 84,80 86,88 89,69 90,51 92,62 96,60 ITZ-HPβCD 79,65 81,96 83,71 85,90 89,09 91,60 93,28 1:3 ITZ-HBβCD 95,32 95,53 98,41 98,64 98,99 98,92 99,12