Chương 1 : TỔNG QUAN
1.2. Tổng quan về một số xét nghiệm sàng lọc, chẩn đoán trước sinh
1.2.2. Các phương pháp chẩn đoán trước sinh
1.2.2.1. Các phương pháp lấy mẫu trong chẩn đoán trước sinh
Phương pháp lấy mẫu xâm lấn
Phương pháp lấy mẫu này ảnh hưởng trực tiếp đến thai và có thể gây tai biến cho thai cũng như cho thai phụ(mất thai, rỉ ối,...). Để giảm bớt rủi ro, việc sàng lọc trước sinh không xâm lấnnhững thai phụ có nguy cơ cao mang thai bất thườngNST sẽ giảm đáng kể số thai phụphải thực hiện xét nghiệm này.
* Hút dịch ối: được thực hiện khi thai từ 16 tuần. Dịch ối có các loại tế bào
ối, da, phổi và tế bào biểu bì đường tiết niệu của thai. Tỷ lệ mất thai do thủ thuật hút dịch ối khoảng 0,11% [5].
Hình 1.6. Kỹ thuật hút dịch ốivà lấy mẫu gai rai
* Lấy mẫu gai rau (Chorionic Villus Sampling - CVS):
Kỹ thuật CVS được thực hiện đầu tiên vào những năm 1960. Kỹ thuật
CVS thường thực hiện từ 11 - 14 tuần thai qua thành bụng, cũng có thể qua
đường âm đạo tùy theo vị trí bánh rau. Ưu điểm của CVS là kết quả thu được
ở tuổi thai sớm hơn so với hút dịch ối. Hạn chế của CVS là tỷ lệ mất thai cao
hơn hút dịch ối [5].
Phương pháp lấy mẫu không xâm lấn
Hiện nay, các nhà khoa học đang quan tâm đến phương pháp lấy mẫu không xâm lấn giúp thai phụtránh được nguy cơ mất thai do thực hiện thủ thuật xâm lấn. Mẫu máu thai phụ có thể sử dụng để phân tích tế bào thai hoặc phân tích DNA thai tự do.
1.2.2.2. Các kỹ thuật di truyền được áp dụng để chẩn đoán trước sinh
Kỹ thuật phân tích bộ NST lập karyotype
Phân tích số lượng và cấu trúc NST dựa trên bộ NST của tế bào ở kỳ
giữa (metaphase) hoặc tiền kỳ giữa (pro-metaphase) để lập karyotype. Kỹ
thuật được sử dụng phổ biến là kỹ thuật nhuộm băng G và được coi là một
trong những phương pháp phân tích di truyền tế bào học truyền thống [25].
Kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ (Fluorescent in situ hybridization - FISH )
Kỹ thuật FISH sử dụng để xác định một cách hiệu quả số lượng và vị trí của các đoạn DNA đặc hiệu trên NST ở kỳ giữa hoặc trong nhân tế bào ở gian kỳ. Việc thực hiện kỹ thuật FISH trên tế bào ở gian kỳ giúp cho thời gian thực hiện xét nghiệm nhanh hơn so với việc lập karyotype [26].
Kỹ thuật định lượng huỳnh quang PCR (Quantitative Fluorescence - Polymerase Chain Reaction)
Từ năm 1993, kỹ thuật QF-PCR có thể chẩn đốn nhanh và chính xác
lệch bội NST 21, 18, 13 và NST giới tính. QF-PCR dựa trên cơ sở sử dụng các cặp mồi gắn huỳnh quang để khuếch đại các chuỗi DNA có trình tự lặp lại
ngắn (STR - Short Tandem Repeat) đặc hiệu cho các NST và có tính đa hình
rất cao. Sản phẩm sau khi khuếch đại được diện di phân tách đoạn và định
lượng bằng máy giải trình tự DNA tựđộng [27].
Kỹ thuật lai so sánh bộ gen (CGH - Array Comparative Genomic Hybridization)
Kỹ thuật array CGH cho phép khắc phục những nhược điểm của kỹ
thuật karyotype và kỹ thuật FISH. Với kỹ thuật array CGH, bất thường NST dạng vi mất đoạn hoặc vi nhân đoạn có thể được phát hiện một cách dễ dàng. Kỹ thuật array CGH thực hiện việc so sánh mẫu DNA cần phân tích với mẫu DNA chứng và thông qua sự khác biệt giữa 2 DNA để phát hiện mất đoạn hoặc nhân đoạn nếu có trên DNA [28].
Kỹ thuật Prenatal BoBs (PN BoBs - Prenatal BACs-on-Beads)
Kỹ thuật PN BoBs là kỹ thuật di truyền phân tử sử dụng rộng rãi trong chẩn đoán trước sinh. Kỹ thuật dựa trên công nghệ sử dụng mẫu dò là các dịng NST nhân tạo có chứa các đoạn ngắn DNA người có gắn hạt từ, thơng qua sự khác biệt giữa DNA mẫu với DNA chứng để phát hiện mất đoạn hoặc
nhân đoạn trên DNA dựa trên khả năng bắt cặp giữa các DNA dò với một mạch đơn của DNA mẫu theo nguyên tắc bổ sung giữa các base khi phản ứng lai xảy ra [29].