- Bản cam kết chấp thuận và thực hiện theo đúng nguyên tắc về đạo đức nghiên cứu
4. Xét nghiệm và soi kính hiển
Xét nghiệm lam máu giọt dày và mỏng, đếm KSTSR để sàng lọc vào ngày D0 và xác định tiêu chuẩn chọn BN hoặc tiêu chuẩn loại trừ. Lam giọt dày cũng sẽ kiểm tra vào các ngày tiếp theo từ D2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 và D42 hoặc bất kỳ ngày nào khác nếu BN quay trở lại tự phát và nên đánh giá lại KSTSR. Những lam máu sẽ được đánh dấu, dán nhãn cẩn thận theo quy đinh trước (số sàng lọc, số nghiên cứu, ngày theo dõi và lấy máu,…). Dung dịch nhuộm pha lỗng sẽ được chuẩn bị ít nhất mỗi ngày một lần và có thể hơn tùy thuộc vào số lam máu làm. Lam giọt mỏng và dày nhuộm giêm sa được soi dưới KHV độ phóng đại 1.000 lần để xác định chủng loại KSTSR và xác định mật độ KSTSR.
Ba lam máu (2 lam giọt dày và 1 lam giọt mỏng) cho mỗi bệnh nhân, trong đó 1 lam sẽ nhuộm nhanh (giêm sa 10% trong 10–15 phút) đối với sàng lọc ban đầu, trong khi các lam khác chúng ta vẫn nhuộm bình thường. Vì khi đủ tiêu chuẩn chọn vào nghiên cứu,
chúng ta sẽ nhuộm lam thứ 2 cẩn thận hơn (nồng độ giêm sa 2.5-3% trong 45-60 phút). Phương pháp nhuộm chậm sẽ sử dụng cho các lam máu khác trong suốt quá trình theo dõi.
Lam máu giọt dày cho sàng lọc ban đầu sẽ được kiểm tra và đếm thể vơ tính so với số bạch cầu (BC) đếm được trong số vi trường. Mật độ KSTSR đủ tiêu chuẩn đưa vào là ít nhất 1 KST so với 3 BC, khoảng 200 thể vơ tính/ µl (đối với những vùng lan truyền cao); ít nhất 1 KST cho 6 BC, tương ứng xấp xỉ 1.000 thể vơ tính/µl (đối với vùng lan truyền bệnh thấp hoặc vừa). Lam máu thứ 2 sẽ dùng để đếm MĐKSTSR cho tất cả BN. Các lam máu được lấy trong suốt thời gian theo dõi BN cùng với quy định trên. MĐKST sẽ được tính bởi cách đếm số lượng thể vơ tính so với số lượng bạch cầu - điển hình là 200 hoặc 300 trên lam giọt dày, sử dụng bàn đếm tay. Nếu 500 KST được đếm trước khi đến số 200 BC, quá trình đếm sẽ dừng lại sau khi đọc vi trường cuối cùng. MĐKSTSR diễn tả như số lượng thể vơ tính trên 1µl máu sẽ được tính bằng cách chia số thể vơ tính cho số BC đếm được rồi nhân với mật độ BC (cụ thể là 8.000 BC/µl).
MĐKSTSR/µl = Số lượng KSTSR đếm được x 8.000 Số lượng BC đếm được.
Hoặc kỹ thuật giống nhau sẽ ứng dụng thiết lập đếm KSTSR trên mỗi lam máu. KSTSR trong máu sẽ được tính bằng cách đếm thể vơ tính so với số BC trong lam giọt dày, khi số thể vơ tính ít hơn 10 trên 200 BC trong lam theo dõi, thì đếm ít nhất 500 bạch cầu (chẳng hạn, hồn thành số vi trường với 500 bạch cầu). Một lam máu được xem là (-) khi soi đủ 1000 BC mà không thấy KST nào. Sự xuất hiện của giao bào trên lam hoặc trong quá trình theo dõi phải được ghi chú, nhưng thơng tin này sẽ khơng góp phần vào đánh giá trong thử nghiệm. Ngoài ra, 100 vi trường của lam giọt dày thứ 2 được kiểm tra sẽ loại trừ nhiễm phối hợp nếu có. Trong trường hợp nghi ngờ, lam giọt mỏng sẽ được kiểm tra để xác định lại; nếu kiểm tra lam giọt mỏng không xác định được, BN sẽ bị loại khỏi nghiên cứu sau khi hồn tất q trình điều trị.
Hai kỹ thuật viên chuyên về KHV sẽ soi độc lập tất cả các lam máu và đếm MĐKSTSR bằng số trung bình của hai người. Các lam máu có kết quả khơng tương ứng (khác nhau giữa hai XNV về chủng loại KSTSR hoặc khác nhau về MĐKSTSR hơn 50% hoặc khác nhau về sự có mặt của KSTSR) sẽ được xét nghiệm lại lần thứ 3 bởi một XNV độc lập và MĐKSTSR sẽ được tính số trung bình của 2 người có giá trị gần tương đương nhau.