Định lượng tác nhân đích có trong mẫu thử
Sử dụng kỹ thuật Realtime PCR có thể biết được số lượng bản DNA đích ban đầu dựa vào sự xuất hiện huỳnh quang của ống phản ứng sớm hay muộn, tức là chu kỳ ngưỡng lớn hay nhỏ. Tùy thuộc vào mục đích cần định lượng mà sử dụng định lượng tuyệt đối hay định lượng tương đối [113].
Định lượng tuyệt đối. Phương pháp này đòi hỏi phải biết rõ lượng (thể
tích, trọng lượng, ...) của mẫu thử. Thực hiện Realtime PCR của mẫu thử cùng lúc với các mẫu chuẩn đã biết trước số lượng rồi tính ra số copy DNA của tác nhân đích.
Định lượng tương đối. Áp dụng phương pháp này khi muốn định lượng
được tác nhân đích nhưng khơng thể cân đo đong đếm được mẫu thử để có được
số liệu chính xác, ví dụ: gen tách ra từ mơ ung thư, khối u ...
Phát hiện khác biệt SNP và xác định kiểu di truyền
Sản phẩm khuếch đại của các trình tự đích có thể khác biệt chỉ một
Realtime PCR hồn tồn có thể ứng dụng để phát hiện khác biệt SNP và xác định kiểu di truyền [113].
Tóm lại, việc phát hiện sự có mặt của DNA phôi thai tự do lưu hành
trong tuần hoàn của thai phụ đã mở ra hướng chẩn đoán trước sinh bằng kỹ
thuật không xâm lấn. Với sự hiểu biết về DNA phôi thai tự do và các kỹ thuật
định lượng DNA thì việc định lượng được DNA phôi thai tự do càng dễ dàng,
nhanh chóng và đỡ tốn kém. Kết quả của các nghiên cứu cho thấy nồng độ
DNA phơi thai tự do lưu hành trong tuần hồn thai phụ tăng lên rõ ràng trước khi khởi phát các triệu chứng lâm sàng của các biến chứng của thai kỳ. DNA phôi thai tự do lưu hành trong tuần hoàn thai phụ nên được coi như là một dấu
ấn quan trọng trong sàng lọc trước sinh không xâm lấn để giúp tiên lượng các
Chương 2.