KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2.3. Thực hiện kỹ thuật PCR lồng để kiểm tra sự có mặt của đoạn gen cần định lượng trong huyết tương thai phụ
cần định lượng trong huyết tương thai phụ
Nhóm nghiên cứu lấy DNA của các mẫu có sản phẩm sau PCR lồng ở trên, tiếp tục thực hiện kỹ thuật PCR lồng với cặp mồi của gen SRY (gen trên NST Y) để phát hiện DNA phôi thai tự do đặc hiệu. Thực hiện PCR lần 1 với cặp mồi Y1.5Y1.6, sau đó lấy sản phẩm của PCR lần 1 thực hiện tiếp PCR lần 2 với cặp mồi Y1.7Y1.8. Kết quả thu được như sau:
Bảng 3.12. Kết quả kiểm tra và phát hiện DNA của gen SRY sau chiết tách bằng PCR lồng với cặp mồi Y1.5Y1.6 và Y1.7Y1.8
Cặp mồi Kích thước sản phẩm Kết quả PCR 1 (chứng nam) 2 (chứng nữ) Thai nam (n=3) Thai nữ (n=3) Y1.5Y1.6 và Y1.7Y1.8 239bp 198bp (gen trên NST Y) + - + - Nhận xét:
Đối với hai cặp mồi Y1.5Y1.6 và Y1.7Y1.8 cho sản phẩm 198 bp thì chỉ mẫu
Hình 3.2. Hình ảnh điện di sản phẩm sau PCR lồng với cặp mồi Y1.5Y1.6 và Y1.7Y1.8
M: Thang DNA 100
Giếng 1: Chứng âm mồi đặc hiệu
Giếng 2: Chứng dương: Khuếch đại mồi đặc hiệu, sản phẩm 198bp
Giếng 3: Chứng âm: Khuếch đại mồi đặc hiệu, khơng có gen đích nên khơng có sản phẩm Giếng 4: Chứng nước cất.
Giếng 5 - 10: Khuếch đại mồi đặc hiệu, sản phẩm 198bp
Giếng 11 – 17: Khuếch đại mồi đặc hiệu, khơng có gen đích nên khơng có sản phẩm
Tiến hành kỹ thuật PCR lồng để kiểm tra tất cả các sản phẩm DNA sau khi chiết tách. Thực hiện PCR lồng lần 1 để kiểm tra sự có mặt của các đoạn
DNA trong huyết tương thai phụ sau khi chiết tách. Thực hiện PCR lồng lần 2
để phát hiện DNA phôi thai tự do trong huyết tương thai phụ đặc hiệu của gen
SRY. Khi các mẫu nghiên cứu cho sản phẩm dương tính ở PCR lồng lần 2 này, chúng tôi mới lấy DNA của các mẫu này để tiến hành thực hiện kỹ thuật
Realtime PCR để định lượng DNA phơi thai tự do, cịn các mẫu nghiên cứu mà cho sản phẩm âm tính ở PCR lồng lần 2 này chúng tôi sẽ loại trừ ra khỏi mẫu
nghiên cứu.
3.2.4. Hoàn chỉnh và xây dựng đường chuẩn của kỹ thuật Realtime PCR để định lượng DNA phôi thai tự do trong huyết tương thai phụ. để định lượng DNA phôi thai tự do trong huyết tương thai phụ.