6. Phương pháp nghiên cứu
3.2.3.Nghiên cứu động thái sinh trưởng của chủng Acetobacter X 4
Động thái sinh trưởng của một chủng vi khuẩn phản ánh khả năng sinh trưởng và sinh sản của chúng trong thời gian nhất định. Để nghiên cứu động thái sinh trưởng của Acetobacter X4 chúng tôi tiến hành nuôi cấy
Acetobacter X4 trên môi trường dịch thể, trong điều kiện nuôi cấy tĩnh, sau những khoảng thời gian định sẵn ở các thời điểm: 0, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96 giờ dịch nuôi cấy được lấy ra 0,1 ml pha loãng rồi trang đều trên môi trường thạch đĩa. Sau sau 3 ngày nuôi ở 300C đếm số khuẩn lạc (CFU) trong môi trường đĩa petri, từ đó xác định số lượng tế bào vi khuẩn. Kết quả thí nghiệm được trình bày ở bảng 3.4 và hình 3.8.
Bảng 3.4. Quá trình sinh trưởng của chủng Acetobacter X4
Thời gian ( h) Số lượng tế bào (x106) δ
0 2,0±0,006 0,10 12 16,9±1,295 0,92 24 48,6±0,682 1,18 36 73,5±0,578 1,00 48 115,1±2,514 4,35 60 125,7±2,405 4,16 72 127,3±0,017 0,03 84 103,1±0,035 0,06 96 90,5±0,099 0,17
Hình 3.8. Đồ thị biểu diễn động thái sinh trưởng của chủng Acetobacter X4
Từ kết quả nghiên cứu ở bảng 3.4 và hình 3.8 ta thấy:
Trong 12 giờ đầu pha lag, số lượng tế bào trong dịch nuôi cấy tăng đều nhưng mức tăng chậm. Giai đoạn này vi khuẩn làm quen với môi trường, tích luỹ chất dinh dưỡng và năng lượng cho các giai đoạn sinh trưởng tiếp theo.
Từ 12 - 48 giờ: Pha cấp số mũ (pha log), ở pha này số lượng tế bào tăng nhanh và đạt giá trị cực đại ở 48 giờ. Từ 24 giờ trở đi trong dịch nuôi cấy bắt đầu xuất hiện những sợi cellulose lơ lửng.
Từ 48 - 72 giờ: Pha cân bằng động, ở pha này số lượng tế bào trong dịch nuôi cấy ổn định; số lượng tế bào chết đi và số lượng tế bào sinh ra
0 50 100 150 0 12 24 36 48 60 72 84 96 Acetobacter X4 Acetobacter X4 Giờ
tương đối bằng nhau. Các sợi cellulose liên kết với nhau tạo thành lớp màng mỏng trên bề mặt môi trường dịch thể dần dần dày dần lên theo thời gian.
Từ 72 giờ trở đi: Pha suy vong, ở pha này số lượng tế bào chết đi nhiều số lượng tế bào sinh ra làm cho tổng tế bào trong dịch nuôi cấy giảm nhanh hơn do nguồn dinh dưỡng cạn kiệt, sản phẩm độc sản sinh trong quá trình trao đổi chất tăng. Trong quá trình sinh trưởng, Acetobacter X4 có thể tích luỹ được lượng acid acetic nhất định trong dịch lên men làm cho giá trị pH môi trường giảm dần theo thời gian 3]. Kết quả trên phù hợp với nghiên cứu của Bergey 16, Đinh Thị Kim Nhung (1996) 2 với số lượng tế bào vi khuẩn đạt cực đại tại 48 giờ.
Như vậy, đã tuyển chọn được 5 chủng vi khuẩn Acetobacter có khả