6. Phương pháp nghiên cứu
2.2.2.Phương pháp hóa sinh
2.2.2.1. Phát hiện hoạt tính catalase
Nhỏ một giọt H2O2 3% lên bề mặt khuẩn lạc, nếu thấy hiện tượng sủi bọt khí thì chủng vi khuẩn đó được coi là có hoạt tính catalase (catalase +). Ngược lại, chủng vi khuẩn đó không có hoạt tính catalase (catalase) [2], [5].
2.2.2.2. Phát hiện khả năng oxy hoá rượu etylic thành acid acetic
Nuôi cấy chủng vi khuẩn trên môi trường có thành phần (g/l):
Cao nấm men: 10g Rượu êtylic: 10%-15% (vol/vol) Nước máy : 1000ml pH: 6,8-7.0
Xanh Bromophenol (BPB) 0,04%: 20ml
Phân môi trường vào các ống nghiệm (4-5ml), khử trùng ở 1210C trong 20 phút, để nguội khoảng 300C cấy vi khuẩn nghiên cứu mới hoạt hoá,
nuôi 7 ngày trong điều kiện thích hợp. Quan sát thấy môi trường chuyển sang màu vàng là dương tính, không đổi màu là âm tính.
Pha dung dịch BPB 0,04%: cân 0,1g BPB nghiền nhỏ trong cốc sứ, sau đó bổ sung 14,9 ml NaOH 0,001N hoà tan cho đều. Đổ tất cả vào bình định mức thêm nước cho đến khi thể tích đạt 250ml [2].
2.2.2.3. Phát hiện khả năng oxy hoá acid acetic
Sử dụng môi trường sau để thử khả năng oxy hoá acid acetic của vi khuẩn tuyển chọn.
Thành phần (g/l): Cao nấm men : 10g Canxi acetat: 10g
Thạch : 20g Nước máy: 1000ml
pH : 7,0-7,2
Quan sát hiện tượng nếu xung quanh khuẩn lạc có vòng phân giải canxi là phản ứng dương tính, ngược lại là âm tính [2], [6], [9].
2.2.2.4. Phát hiện khả năng chuyển hóa glycerol thành dihydroxyacetone
Để phát hiện khả năng hình thành dihydroxyacetone từ glycerol. Chúng tôi tiến hành trên môi trường bao gồm thành phần sau:
Glycerol: 4% (g/l) Cao nấm men: 0,3 % (g/l) Cao ngô: 3% (g/l) CaCO3 : 0,3% (g/l) (NH4)2SO4: 0,1% (g/l) H2O: 1000ml pH = 5,3
Hấp thanh trùng 1210C trong 10 phút. Để môi trường nguội cấy giống vi khuẩn nghiên cứu nuôi lắc 140 vòng/ phút ở nhiệt độ 300C trong vòng 48h. Nhỏ dung dịch Fehling để kiểm tra sự tạo thành dihydroxyacetone (có sự xuất hiện kết tủa Cu2O màu đỏ gạch).
2.2.2.5. Sinh trưởng trên môi trường Hoyer
Thành phần môi trường: (g/l)
(NH4)2SO4: 1g KH2PO4 : 0,9g
FeCl3.6H2O: 0,02g MgSO4.7H2O: 0,25g K2HPO4 : 0,1g Rượu êtylic 99,5%: 20ml
Hấp thanh trùng 1210C trong 15 phút. Để môi trường nguội bổ sung giống nghiên cứu nuôi ở nhiệt độ khoảng 300C trong 0, 12, 24, 48 giờ sau đó đếm số lượng tế bào trên buồng đếm.
2.2.2.6. Phát hiện khả năng tổng hợp cellulose
Nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường dịch thể ở nhiệt độ 28 - 300C trong vòng 3 - 4 ngày, quan sát sự hình thành màng. Kiểm tra khả năng bắt màu của màng bằng cách nhỏ lên đó dung dịch lugol và H2SO4 60% nó chuyển hoá thành màu xanh lam.
2.2.2.7. Phương pháp xác định khả năng tổng hợp acid bằng chuẩn độ với NaOH 0,1N có phenolphtalein 0,1% làm chỉ thị
Cho vào cốc thủy tinh (loại 100 ml hoặc 200 ml) dịch lên men thêm vào đó 1 – 2 giọt phenolphtalein 0,1%, chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,1N. Chú ý chuẩn độ cần phải lắc nhẹ đến khi dung dịch chuyển sang màu hồng nhạt. Sau đó tính số gam acid tổng số trong 100 ml dung dịch lên men theo công thức:
= . .100
10 ( / )
Trong đó: X : Số gam acid tổng số trong 100 ml dung dịch lên men (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
V : Số ml NaOH 0,1N dùng để chuẩn độ 10 ml dung dịch lên men K : Lượng acid tổng số tương ứng với 1 ml NaOH 0,1N (K = 0,006) 10 : Số ml dịch lên men đem chuẩn độ [6], [9]