7 10 18a 20a 21 23a 23b 24 25a 25b
3.5.3. Bảo quản nguồn VSVSMT trong điều kiện phịng thí nghiệm
Nguồn VSVSMT ứng dụng cho công nghệ phân hủy kỵ khí sinh methane ở điều kiện nước lợ và nước biển gồm mẫu làm giàu NTLRE3 và chủng Methanosarcina sp. M37 được bảo quản trong các dụng cụ mao quản thủy tinh đảm bảo tính kỵ khí hồn tồn theo phương pháp của Hippe (1991). Các bước tiến hành như sau (Hình 3.16).
1. Ni CKSMT trong các ống nghiệm kỵ khí thể tích 8 ml (kích thước phù hợp với máy ly tâm) chứa 5 ml môi trường (đạt OD600 0,3).
2. Ly tâm dịch nuôi trực tiếp trong ống nuôi (không mở nắp) tại 5000 v/p trong 15 phút (20C).
3. Mở nắp ống (trong điều kiện sục khí N2/CO2 liên tục), loại dịch trên bằng pipet Pasteur.
4. Bổ sung 1 ml dung dịch khống (có 5% DMSO), khuấy đều bằng pipet Pasteur để có dịch huyền phù đồng nhất.
5. Bằng dụng cụ chuyên dụng hút 25 l dịch tế bào vào mao quản thủy tinh, hàn kín hai đầu trên ngọn lửa, sau đó giữ ở 4C trong 30 phút rồi chuyển vào lạnh sâu đồng thời ở 20C và 80C. Mỗi tổ hợp chủng CKSMT được giữ trong 30 mao quản (10 mao quản tại mỗi điều kiện bảo quản). 6. Định kỳ (1 lần mỗi 6 tháng 1 năm) kiểm tra độ sống sót của CKSMT
Kết quả kiểm tra định kỳ cho thấy VSVSMT bảo quản theo hình thức này có mức độ sống sót cao và hoạt tính sinh methane ổn định sau 1 năm. Việc kiểm tra còn tiếp tục được tiến hành để khảo sát thời gian bảo quản dài hơn.
Hình 3.16. Quy trình bảo quản VSVSMT trong điều kiện phịng thí nghiệm. Phần giới hạn
bằng 2 mũi tên trên mao quản thủy tinh là dịch tế bào trong môi trường + DMSO 5%
Nhận xét: Nguồn VSVSMT có hoạt tính cao là chủng Methanosarcina sp.
M37 và mẫu làm giàu NTLRE3 đã được lựa chọn để tạo nguồn giống khởi động cho quá trình lên men kỵ khí sinh methane. Quy trình tạo giống khởi động BKM sử dụng cám gạo lên men đã được thiết lập với kết quả ổn định. Nguồn giống VSVSMT đã được lưu giữ và bảo quản trong điều kiện lạnh sâu đảm bảo kỵ khí và bảo tồn hoạt tính.