- Chỉ tiêu theo dõi:
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THAỎ LUẬN
3.4.2. Ảnh hưởng của hàm lượng Acetosyringone (AS) ựến tỷ lệ biểu hiện tạm thời của gen Gus
của gen Gus
Bảng 3.8: Ảnh hưởng của hàm lượng AS (Acetosyringone) ựến sự biểu hiện tạm thời của gen Gus.
CT Nồng ựộ AS (ộM/l) Số mẫu nhuộm Gus Số mẫu có ựốm xanh Tỷ lệ biểu hiện tạm thời (%) 1(đ/C) 0 300 0 0,00 2 50 300 41 13,67 3 100 300 53 17,67 4 200 300 43 14,33
Trong tự nhiên, các tế bào thực vật khi bị tổn thương sẽ tiết ra các hợp chất dẫn dụ vi khuẩn như: Acetosyringone, hydroxy-acetosyringonẹ Dưới tác dụng của các hợp chất dẫn dụ, vi khuẩn Ạtumefaciens nhận biết rồi bám vào thành tế bào chủ và chuyển T-DNA vào tế bào thực vật. Cũng chắnh các hợp chất này, với vai trò cảm ứng giúp cho các gen vùng vir trên Ti-plasmid hoạt ựộng và tăng cường biểu hiện (Zupan & cs, 2000)[51]. Thắ nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng AS ựến khả năng xâm
nhiễm của Agrobacterium vào lá mầm cà chua nhằm xác ựịnh hàm lượng AS thắch
hợp cho quá trình biến nạp. Trước khi chuyển gen, Acetosyringone ựược bổ sung vào dung dịch huyền phù vi khuẩn ở các nồng ựộ 0,50, 100 ộM, mật ựộ vi khuẩn ựược sử dụng trong thắ nghiệm này là OD= 0,5
Kết quả trình bày ở Bảng 3.8 cho thấy các nốt lá mầm sau khi lây nhiễm và nuôi cấy cộng sinh trong môi trường không có AS không có biểu hiện của gen Gus. Việc bổ sung AS vào môi trường ựồng nuôi cấy ựã có tác ựộng rõ rệt ựến khả năng xâm nhiễm của vi khuẩn Agrobacterium vào mô thực vật. Thắ nghiệm tăng dần hàm
lượng AS ựã thu ựược kết quả tần số biểu hiện gen Gus lần lượt: 13,67% khi bổ sung 50 ộM/l, 17,67% khi bổ sung 100 ộM/l AS. Nhưng khi tăng nồng ựộ AS lên tới 200
ộM/l thì tần số biểu hiện gen tạm thời giảm xuống. Có thể thấy, ngưỡng hàm lượng AS bổ sung vào môi trường ựồng nuôi cấy cho tần số biểu hiện gen tối ưu ở 100 ộM/l.
Xét về mức ựộ biểu hiện của gen Gus, chúng tôi thấy rằng ở các công thức thắ nghiệm có nồng ựộ AS 100ộM xuất hiện nhiều các ựốm xanh ựậm, tập trung thành ựám trên phần nốt lá mầm lây nhiễm, trong khi ựó ở công thức thắ nghiệm với nồng ựộ AS thấp hơn 50ộM, các ựốm xanh tràm xuất hiện rời rạc trên bề mặt phôi lây nhiễm.