2.1..6 Phương pháp sắc kí lớp mỏng
2.5.5. Phương pháp đánh giá hành vi vận động
Nguyên tắc: Các rối loạn vận động ở mơ hình chuột C57BL/6J (từ Jackson Laboratory, Bar Habor, Maine, Hoa Kỳ) khoảng 3 tháng tuổi, cân nặng trung bình 23 gr cảm ứng bằng 15 mg/kg/liều x 2 liều cách quãng 12h sau được ghi nhận theo
phương pháp của Tillerson và Miller [21, 61] bao gồm sự suy giảm đáng kể khoảng cách trung bình của bước chân trước và gia tăng đáng kể thời gian tiếp xúc với bề mặt nâng đỡ cũng như tỉ lệ bước chân bị lỗi (p < 0.01). Trong nghiên cứu này, phương pháp của Tillerson và Miller được sử dụng và vì một số lý do chỉ giới hạn trong việc đánh giá khoảng cách bước chân trung bình.
Quy trình tiến hành:
- Trong thời gian 1 tuần nuôi ổn định, chuột được cho làm quen với lưới. Ưu tiên những chuột có khả năng bám và di chuyển đều đặn trên lưới trong khoảng 15 giây, không chọn những chuột hồn tồn khơng có khả năng di chuyển trên lưới. - Cho chuột ăn uống đầy đủ trước khi tiến hành thu nhận dữ liệu. Thời điểm thu
nhận là buổi sáng. Ghi nhận quá trình di chuyển của chuột trên lưới úp ngược bằng camera trong khoảng 15-20 giây. Lặp lại 2 lần cho mỗi chuột, tiến hành một lượt cho tất cả chuột, sau đó lặp lại lần 2.
- Video ghi nhận quá trình di chuyển của chuột được cắt thành các khung hình (frame) bằng phần mềm KMPlayer ver 3.9. Sau đó các khung hình có chứa vị trí bắt đầu và vị trí kết thúc của 1 bước chân được chọn ra.
- Các khung hình sau đó được đặt chồng lên nhau, vị trí các bước chân được đánh dấu bằng công cụ “counter”; khoảng cách của các bước chân được đo bằng công cụ “ruler” của phần mềm Adobe Photoshop CC 2014.
Đánh giá kết quả: Dữ liệu khoảng cách các bước chân của chân trước bên trái và
bên phải được ghi nhận trong 2 ngày được tính tốn để có được khoảng cách bước chân trung bình của từng chuột. Thực hiện quy trình tương tự sau khi chuột đã được tiêm thuốc, dữ liệu thu được sau đó được phân tích bằng phần mềm Excel và Graphpad Prism.