22- 24oC 26 28oC 30-32oC 34 36oC Ngưỡng nhiệt ựộCC
3.2.4. Thử phản ứng siêu nhạy của các dòng vi khuẩn gây bệnh héo xanh trên cây thuốc lá (Nicotiana tabacum)
cây thuốc lá (Nicotiana tabacum)
Thử phản ứng siêu nhạy là một trong những phương pháp giúp xác ựịnh nhanh tắnh ựộc của các vi khuẩn gây bệnh héo xanh. Sau khi phân lập ựược vi khuẩn R. solanacearum thuần, chúng tôi tiến hành kiểm tra tắnh ựộc của các dòng vi khuẩn trên cây thuốc lá Nicotiana tabacum bằng phản ứng siêu nhạỵ Sau 24, 48 và 72 giờ tiêm chủng thấy có xuất hiện ựám mô chết hoại tử màu nâu xám, thì chứng tỏ vi khuẩn vi khuẩn phân lập ựược là loài kắ sinh gây bệnh vẫn còn tắnh ựộc.
xanh trên cây cà chua, lạc, cà pháo, khoai tây,... ựược nuôi cấy trên môi trường thạch nghiêng SPA trong 48 giờ. Pha dịch vi khuẩn trong nước cất vô trùng với nồng ựộ 108 CFU/1ml. Sử dụng 0.1 ml tiêm vào lớp trong của tế bào biểu bì (khoảng gian bào) của mặt dưới phiến lá của cây thuốc lá. Theo dõi và quan sát sự biểu hiện của phản ứng sau 24, 48 và 72 giờ kết quả thu ựược ở bảng 3.11.
Bảng 3.11: Kết quả kiểm tra phản ứng siêu nhạy của các dòng vi khuẩn trên cây thuốc lá (Nicotiana tabacum)
STT Dòng vi khuẩn Biểu hiện phản ứng siêu nhạy
1 CC1 + 2 CP + 3 L1 + 4 CC2 + 5 KT1 + 6 KT2 + 7 L2 + 8 đối chứng - Ghi chú:
CC2: Cà chua - Thái đào - Lạng Giang - Bắc Giang L2: Lạc - An Thượng - Yên Thế - Bắc Giang
KT2: Khoai tây - Tư Mại - Yên Dũng - Bắc Giang
+: có phản ứng siêu nhạỵ -: không có phản ứng siêu nhạỵ
Trong 7 dòng vi khuẩn gây bệnh héo xanh phân lập từ một số cây ký chủ ựược kiểm tra phản ứng siêu nhạy, ựều cho biểu hiện triệu chứng ựó là các dòng vi khuẩn ựược phân lập từ cà chua (Tiên Hưng - Lục Nam), cà chua (Thái đào - Lạng Giang), cà pháo (Bảo đài - Lục Nam), lạc (Tân Mỹ - thành phố Bắc Giang), lạc (An Thượng - Yên Thế), khoai tây (đông Phú - Lục Nam) và khoai tây (Tư Mại - Yên Dũng). Sau khi tiêm chủng lên cây thuốc lá các dòng vi khuẩn gây bệnh héo xanh ựều biểu hiện sau 24 - 48 giờ, các dòng vi khuẩn có ựộc tắnh sẽ thấy xuất hiện các vết hoại tử, sau 3 - 4 ngày vết mô hoại tử. Nếu các dòng vi khuẩn mất tắnh ựộc sẽ
không tạo vết mô chết hoại khi tiến hành tiêm chủng kiểm tra phản ứng siêu nhạy trên mô lá thuốc lá.
Ảnh 3.12: Thử phản ứng siêu nhạy vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith trên mô lá thuốc lá