Chương 2 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.3. Phương pháp bố trắ thắ nghiệm trong nhà lướ
2.3.3.1. Phương pháp thử phản ứng siêu nhạy trên cây thuốc lá của các dòng vi khuẩn gây bệnh
Các dòng vi khuẩn thuần khiết ựược phân lập từ các mẫu vi khuẩn héo xanh trên cây cà chua, cà pháo, lạc, khoai tây ựược nuôi cấy trên môi trường mặt nghiêng SPA trong 48 giờ. Pha dịch vi khuẩn trong nước cất vô trùng với nồng ựộ 108 tế bào vi khuẩn/1ml. Tiến hành tiêm vào mặt dưới phiến lá cây thuốc lá (Nicotiana tabacum). Quan sát phản ứng sau 24 - 48 giờ.
2.3.3.2. Nghiên cứu tắnh gây bệnh của các dòng vi khuẩn Ralstonia solanacearum phân lập trên các cây kắ chủ khác nhau
Bố trắ thắ nghiệm: Thắ nghiệm ựược tiến hành lây nhiễm với 4 loài cây trồng cà chua, lạc, cà pháo, khoai tây ựược trồng trên nền ựất phù sa và lây nhiễm bằng 4 isolate vi khuẩn R. solanacearum phân lập trên cà chua, cà pháo, lạc, khoai tây tại Bắc Giang. Khi các cây ký chủ ựạt tiêu chuẩn lây nhiễm, ta tiến hành lây bệnh nhân tạo bằng phương pháp sát thương rễ (dùng dao sạch sát thương về một phắa sâu 2cm, rộng 3cm) sau ựó tưới 10 ml dịch vi khuẩn R. solanacerum với nồng ựộ 108- 109cfu/ml. Mỗi isolate là một công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần nhắc lại 30 câỵ
Chỉ tiêu: theo dõi số cây bị bệnh sau 10 ngày lây nhiễm, tắnh tỷ lệ bệnh.
2.3.3.3. Khảo sát hiệu lực ựối kháng của vi khuẩn Bacillus subtilis trong phòng trừ bệnh héo xanh vi khuẩn hại cà chua trong ựiều kiện châu vại
Thắ nghiệm thực hiện trong chậu vại với giống cà chua HT7 trên nền ựất phù sa + phân ủ chè.
Công thức 1 (CT1): đối chứng (Sát thương rễ và tưới 10 ml dung dịch vi khuẩn R. solanacearum)
khuẩn R. solanacearum + 10 ml dung dịch vi khuẩn ựối kháng Bacillus subtilis.
Công thức 3 (CT3): Tưới 10 ml dung dịch vi khuẩn Bacillus subtilis, sau 2 ngày thì sát thương rễ và tưới 10 ml dung dịch vi khuẩn R. solanacearum.
Công thức 4 (CT4): Sát thương rễ, tưới 10 ml dung dịch vi khuẩn R. solanacearum, sau 2 ngày thì tưới 10 ml dung dịch vi khuẩn Bacillus subtilis.
Nồng ựộ dung dịch vi khuẩn R. solanacearum và Bacillus subtilis dùng trong thắ nghiệm từ 108- 109 cfu/ml.
Mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần nhắc lại 30 câỵ
Chỉ tiêu: theo dõi số cây bị bệnh, tắnh tỷ lệ bệnh (%) sau 5, 10, 15 ngày lây nhiễm.