Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 điều tra ựánh giá mức ựộ phổ biến và tác hại của bệnh HXVK hại một số
3.2.2. đặc ựiểm hình thái tế bào khuẩn lạc của vi khuẩn Ralstonia solanacearum
Smith
Nghiên cứu về ựặc ựiểm hình thái của tế bào khuẩn lạc nhằm giúp cho việc phân biệt, giám ựịnh giữa loài vi khuẩn gây bệnh héo xanh Ralstonia solanacearum
với các loài vi khuẩn hại cây trồng khác.
Từ các dòng vi khuẩn phân lập ựược trên các cây ký chủ nhiễm bệnh, chúng tôi tiến hành nghiên cứu màu sắc, hình thái khuẩn lạc khi nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường nhân tạo TZC, SPA và nhuộm Gram vi khuẩn. Tất cả các mẫu ựược nuôi cấy ở nhiệt ựộ 30- 32oC. Tiến hành theo dõi ựặc ựiểm hình thái, màu sắc khuẩn lạc sau 24, 48,72 giờ nuôi cấy kết quả nghiên cứu ựược thể hiện ở bảng 3.7.
Kết quả thắ nghiệm cho thấy 4 dòng vi khuẩn gây bệnh héo xanh trên cây cà chua, cà pháo, lạc, khoai tây trên môi trường SPA và TZC ựều có những ựặc ựiểm chung, ựặc trưng. Trên môi trường SPA khuẩn lạc có dạng tròn, nhẵn bóng, bề mặt khuẩn lạc lồị Trên môi trường TZC khuẩn lạc có hình dạng không ựều, tròn, nhẵn, có rìa màu trắng, ở giữa có phớt màu hồng nhạt. điều ựó có thể khẳng ựịnh vi khuẩn Ralstonia solanacearum có phổ ký chủ rộng, ký sinh và gây hại trên nhiều loại cây trồng khác nhaụ
Tuy nhiên trên môi trường SPA màu sắc khuẩn lạc của các dòng vi khuẩn có sự sai khác: Màu trắng kem, trắng sữạ
Kết quả phản ứng nhuộm Gram các isolate của 4 dòng vi khuẩn phân lập từ cà chua, cà pháo, lạc, khoai tây ựều nhuộm Gram âm.
Vi khuẩn héo xanh Ralstonia solanacearum mất tắnh ựộc tương ựối nhanh khi tiến hành cấy chuyền nhiều lần qua các môi trường dinh dưỡng. Có sự tương quan giữa hình dạng, màu sắc khuẩn lạc với tắnh ựộc của vi khuẩn héo xanh. Trên môi trường ựặc hiệu TZC (Triphenyl Tetrazolium Chlorite) (Kelman, 1954) các khuẩn lạc có dạng nhẵn, rìa có màu trắng, ở giữa có phớt màu hồng nhạt chứng tỏ còn ựộc tắnh. Với các khuẩn lạc vi khuẩn ựã mất tắnh ựộc có dạng nhỏ, màu ựỏ sẫm hoặc có màu trắng kem. Khi nuôi cấy trên môi trường SPA các khuẩn lạc vi khuẩn còn ựộc tắnh có dạng to, tròn, lồi, nhẵn bóng. Các khuẩn lạc vi khuẩn ựã mất tắnh ựộc thường nhỏ hơn, dạng nâu, nhăn nheọ
Bảng 3.7: Một số ựặc ựiểm hình dạng, màu sắc khuẩn lạc các dòng vi khuẩn
Ralstonia solanacearum Smith trên môi trường nhân tạo
Hình dạng, màu sắc khuẩn lạc trên môi trường Chỉ tiêu Dòng vi khuẩn SPA TZC Nhuộm Gram CC1 Khuẩn lạc tròn, nhẵn bóng, màu trắng kem Khuẩn lạc tròn, nhày, hình dạng không ựều, rìa khuẩn lạc có màu trắng, ở giữa có phớt màu hồng nhạt. Âm CP Khuẩn lạc tròn, nhẵn bóng, màu trắng sữa Khuẩn lạc tròn, nhày, hình dạng không ựều, rìa khuẩn lạc có màu trắng, ở giữa có phớt màu hồng nhạt. Âm L1 Khuẩn lạc tròn, nhẵn bóng, màu trắng sữạ Khuẩn lạc tròn, nhày, hình dạng không ựều, rìa khuẩn lạc có màu trắng, ở giữa có phớt màu hồng nhạt. Âm KT1 Khuẩn lạc tròn, nhẵn bóng, màu trắng sữạ Khuẩn lạc tròn, nhày, hình dạng không ựều, rìa khuẩn lạc có màu trắng, ở giữa có phớt màu hồng nhạt.
Âm
Ghi chú:
CC1: Cà chua - Tiên Hưng - Lục Nam - Bắc Giang CP: Cà pháo - Bảo đài - Lục Nam - Bắc Giang L1: Lạc - Tân Mỹ - Tp Bắc Giang - Bắc Giang KT1: Khoai tây - đông phú - Lục Nam - Bắc Giang
Ảnh 3.9: Sự phát triển của vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith trên môi trường SPA
Ảnh 3.10: Sự phát triển của vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith trên môi trường TZC