Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 điều tra ựánh giá mức ựộ phổ biến và tác hại của bệnh HXVK hại một số
3.2.1. Phương pháp phân li nuôi cấyvi khuẩn gây bệnh
Ở giai ựoạn cây bắt ựầu ra hoa trở ựi bị nhiễm bệnh, ban ựầu các lá ngọn bị héo rũ xuống trước, có thể chỉ bị héo một cành hoặc một nhánh, dần lan xuống lá phắa gốc và héo toàn câỵ Ban ựầu khi mới nhiễm bệnh, cây bị héo vào ban ngày do bị thiếu nước, vào ban ựêm và sáng sớm cây lại phục hồi trở lạị Sau một thời gian cây không còn khả năng phục hồi, cây bị héo rũ tái xanh gục xuống và chêt.
Khi quan sát triệu chứng giữa cây bị bệnh và cây khỏe ngoài ựồng ruộng cho thấy, những cây bị bệnh thường có phần gốc sù sì. Cắt ngang thân cây sẽ thấy các bó mạch có màu nâu ựen hoặc nâu sẫm, ấn mạnh vào ựầu vết cắt có thể thấy dịch màu trắng sữa tiết rạ
* Phương pháp chẩn ựoán nhanh bệnh héo xanh vi khuẩn
Quan sát triệu chứng cây héo, khi cắt ngang thân có màu nâu, thâm ựen tiến hành cắt ựoạn thân cây bệnh 3- 5cm, ựặt trong cốc nước sạch sau vài phút nếu thấy dịch vi khuẩn màu trắng sữa tiết ra trên ựầu vết cắt và trong cốc thì ựó là bệnh do vi khuẩn héo xanh Ralstonia solanacearum Smith gây rạ
Phân ly nuôi cấy: Chọn những cây có triệu chứng ựiển hình, cắt mô bệnh ở mạch dẫn, lấy phần danh giới giữa mô bị bệnh và mô khỏe, cấy vào môi trường chọn lọc TZC. Dùng que cấy vi khuẩn ựã ựược khử trùng trên ngọn lửa ựèn cồn, lấy dịch vi khuẩn từ trên bề mặt vết cắt của thân cây bệnh cấy trên môi trường chọn lọc TZC (Kelman, A, 1954). Nuôi cấy trong ựiều kiện nhiệt ựộ 30- 32oC. Theo dõi sự phát triển của vi khuẩn sau 24- 48 giờ, các khuẩn lạc riêng rẽ, tròn, có hình dạng không ựều, nhày, rìa khuẩn lạc có mù trắng sữa, ở giữa có phớt màu hồng nhạt. Cấy chuyển sang môi trường SPẠ Theo dõi sự phát triển của vi khuẩn trên môi trường: Khuẩn lạc có dạng tròn nhẵn bóng màu trắng kem, bề mặt ướt ựó chắnh là vi khuẩn
Ralstonia solanacearum thuần khiết.
để bảo quản vi khuẩn không bị mất tắnh ựộc, chúng tôi tiến hành nuôi cấy và cất giữ các isolate vi khuẩn trong nước vô trùng ở nhiệt ựộ 4- 6oC.