4.6b Ảnh hưởng của sát nhau đối với bệnh viêm tử cung ở bò sữa
4.7. Kết quả thử phản ứng WST phát hiện bệnh viêm tử cung
4.3.3. Kết quả xác định sự biến đổi về thành phần vi khuẩn hiếu khí có trong dịch viêm tử cung của bò sữa
Các mẫu bệnh phẩm được tiến hành phân tích để tìm ra sự có mặt của các loại vi khuẩn trong dịch tử cung, từ đó thấy được sự biến đổi về thành phần của các vi khuẩn trong tử cung của bị bị viêm và khơng bị viêm tử cung. Kết quả được thể hiện ở bảng 4.9.
Bảng 4.9. Tần suất xuất hiện của một số vi khuẩn hiếu khí trong dịch tử cung
VK
Dịch tử cung của bị khơng bị viêm tử cung (n = 50) Dịch tử cung của bò bị viêm tử cung (n = 50) n + Tỷ lệ (%) n + Tỷ lệ (%) E. coli 0 0 0 0 Salmonella 0 0 0 0 Staphylococcus spp 12 24,00 50 100 Streptococcus spp 8 16,00 50 100
Ghi chú: n +: Số lượng mẫu phát hiện vi khuẩn
Kết quả cho thấy, tất cả các mẫu dịch tử cung ở bị khơng bị viêm tử cung và bị bị viêm tử cung đều khơng có E.coli và Salmonella. Đối với dịch tử cung của bị khơng bị viêm, tỷ lệ mẫu phát hiện thấy Staphylococcus và Streptococcus lần lượt là 24,00% và 16,00%. Đối với dịch viêm tử cung, Staphylococcus và Streptococcus
được phát hiện ở 100% mẫu bệnh phẩm.
Một số kết quả nghiên cứu khác cho thấy ngoài hai loại vi khuẩn trên thì
E. coli, Salmonella, Brucella, roi trùng cũng có thể xuất hiện ở trong dịch tử cung
âm đạo của bò sữa (Nguyễn Văn Thanh, 2007). Trong nghiên cứu của nhóm tác giả trên, mẫu bệnh phẩm được lấy từ các bò sữa loại thải, được giết mổ ở các lò mổ. Những bò sữa này thường là những con mắc bệnh, không chửa đẻ, viêm đường sinh dục nặng nên việc có các lồi vi khuẩn khác như E. coli, Salmonella, Brucella, roi
trùng trong đường sinh dục là có cơ sở.
Theo tác giả Pulfer and Riese (1991), ở thời điểm ngay sau khi đẻ, các vi
khuẩn thường có mặt trong dịch tử cung đó là Actinomyces pyogenes,
Streptococcus spp, Staphylococcus spp, Clostridium spp, coliforms và vi khuẩn
Gram âm yếm khí. Trong nghiên cứu này, việc chỉ tìm thấy Streptococcus spp và
Staphylococcus spp mà khơng tìm thấy vi khuẩn Gram âm yếm khí, Clostridium spp có thể là do mẫu dịch tử cung được lấy ở thời điểm 24-48h sau đẻ và nghiên
cứu này chỉ mới tiến hành đối với các vi khuẩn hiếu khí. Việc khơng tìm thấy các vi khuẩn khác có thể do sự khác nhau về mơi trường chăn ni và khí hậu.
Nghiên cứu trên 51 mẫu sinh thiết tử cung bò sữa, Gani et al. (2008) thấy
rằng có đến 62,2% (23/37) mẫu từ bị khó chửa có xuất hiện vi khuẩn, trong khi đó ở bị có hoạt động chửa đẻ bình thường thì tỉ lệ này chỉ là 28,6% (4/14). Đối với mẫu lấy từ bò bệnh, Staphylococcus là vi khuẩn thường gặp nhất với tỉ lệ 37,84% (14/37) số mẫu, kế đến là Bacillus trong 35,14% (13/37) số mẫu, E. coli trong
que trong 24,32% (9/37). Tác giả trên cũng cho biết Pseudomonas và vi khuẩn
Gram âm dạng que chỉ xuất hiện ở những trường hợp bò bị viêm mủ nặng.
Tác giả Dolezel et al. (2010) cho biết, ở trong dịch tử cung sau đẻ của bị khơng có triệu chứng viêm tử cung thì Bacillus spp là vi khuẩn xuất hiện nhiều nhất chiếm 46% kế đến là E. coli chiếm 23% và khơng có Staphylococcus và
Arcanobacterium pyogenes. Tuy nhiên, ở bị sữa có triệu chứng viêm nhẹ thì Arcanobacterium pyogenes xuất hiện ở 44%, khơng tìm thấy E. coli và
Staphylococcus xuất hiện ở 13% mẫu bệnh phẩm. Đặc biệt khi bò bị viêm tử
cung nặng thì có tới 75% mẫu bệnh phẩm xuất hiện Arcanobacterium pyogenes các vi khuẩn Bacillus spp, E. coli, Staphylococcus xuất hiện với tỉ lệ lần lượt là 25,00%, 25,00% và 13,00%. Trong nghiên cứu trên, tác giả kết luận rằng vi khuẩn Arcanobacterium pyogenes là yếu tố quan trọng gây ra bệnh viêm tử cung ở bò sữa.
Nghiên cứu trên bò bị viêm nội mạc tử cung, tác giả Moges et al. (2013)
cho biết 91,66% mẫu bệnh phẩm bị nhiễm một trong các vi khuẩn S. pyogenes,
E. coli hoặc Streptococcus spp. Trong đó tỉ lệ mẫu dịch tử cung có chứa S. pyogenes là 25%, E. coli là 20,8%, Streptococcus spp là 20,8%. S. aureus là
12,5%, Klebsiella spp là 8,3% và C. fetus là 4,2%.
Theo Nguyễn Văn Thanh và cs. (2016), vi khuẩn Staphylococcus spp. và
Streptococcus spp. xuất hiện ở 100% mẫu dịch viêm tử cung bò và trong dịch tử
cung của bị khơng bị viêm, tỷ lệ mẫu phát hiện thấy Staphylococcus spp. và
Streptococcus spp. đều là 20,00%.
Hình 4.8. Hình ảnh phân lập Streptococcus và Staphylococcus trên mơi trƣờng thạch máu
Hình 4.9. Phân lập Salmonella trên mơi trƣờng SS agar
Hình 4.10. Phân lập E.coli trên mơi trƣờng EM agar
4.4. TÍNH MẪN CẢM VỚI KHÁNG SINH CỦA MỘT SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ ĐƢỢC PHÂN LẬP TỪ DỊCH TỬ CUNG BÕ SỮA
4.4.1. Kết quả xác định tính mẫn cảm của các vi khuẩn phân lập đƣợc từ dịch tử cung bò sữa với một số thuốc kháng sinh thông dụng
Vi khuẩn Staphylococcus và Streptococcus phân lập từ 15 mẫu dịch tử cung của bò bị viêm tử cung được tiến hành làm kháng sinh đồ nhằm đánh giá tính mẫn cảm của của chúng với một số thuốc kháng sinh, kết quả được trình bày tại bảng 4.10.
Trong tổng số 14 loại kháng sinh được lựa chọn để thử tính mẫn cảm của 2
loại vi khuẩn Staphylococcus và Streptococcus thì Norfloxacin là loại kháng sinh
có tính mẫn cảm cao nhất đối với cả 2 loại vi khuẩn: 86,67% (13/15) đối với
Staphylococcus và 93,33% (16/17) đối với Streptococcus. Hai loại vi khuẩn trên
cũng mẫn cảm cao với Amoxicillin, đều ở mức 86,67%. Hai loại kháng sinh Tetracycline và Kanamycin cũng cho tỉ lệ tính mẫn cảm cao (≥80%) đối với 2 loại vi khuẩn này. Nghiên cứu của chúng tôi giống với một số công bố trước đây. Nguyễn Văn Thanh và cs. (2007) nghiên cứu thử nghiệm điều trị bệnh viêm tử cung bò cho biết Norfloxacin là một trong những thuốc có tác dụng tốt trong điều trị bệnh viêm tử cung ở bò (bảng 4.10).
Trong một số nghiên cứu khác, Gani et al. (2008) cũng cho biết các vi
khuẩn trong tử cung của bị sữa khơng bị viêm và bị sữa bị viêm tử cung bao gồm Staphylococcus spp, Bacillus spp, E. coli và Pseudomonas spp mẫn cảm cao
với các kháng sinh Amoxicillin, Oxytetracycline và Ciprofloxacin. Moges et al.
cung mẫn cảm cao với các kháng sinh Sulphamethaxazole, Polymixin, Tetracycline, Gentamycin và Cefoxitin. Trong khi đó vi khuẩn Streptococcus spp mẫn cảm cao với tất cả các kháng sinh được thử đó là Sulphamethaxazole, Polymixin, Ampicillin, Oxacillin, Gentamycin, Cefoxitin và Vancomycin.
Bảng 4.10. Tính mẫn cảm của vi khuẩn Staphylococcus spp và Streptococcus
spp phân lập đƣợc từ dịch viêm tử cung bò sữa với một số thuốc kháng sinh
VK KS Staphylococcus spp Streptococcus spp n + Tỷ lệ (%) n + Tỷ lệ (%) Amoxicillin 13 86,67 13 86,67 Ceftiofur 11 73,33 12 80 Enrofloxacin 7 46,67 5 33,33 Norfloxacin 13 86,67 14 93,33 Doxycycline 4 26,67 3 20 Tetracycline 13 86,67 12 80 Streptomycin 0 0 0 0 Kanamycin 12 80 12 80 Colistin 0 0 0 0 Lincomycin 0 0 0 0 Erythromycin 0 0 1 6,67 Tylosin 0 0 1 0 Floxy 2 13,33 2 13,33 Tiamulin 3 20 0 0
Ghi chú: n +: Số lượng mẫu mẫn c m với kháng sinh
Sự khác nhau về tính mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn giữa nghiên cứu của chúng tôi với các nghiên cứu trước đây cho thấy sự kháng kháng sinh của vi khuẩn ở các địa điểm nghiên cứu khác nhau có khác nhau. Sự khác nhau này phụ thuộc vào sự biến đổi của vi khuẩn gây bệnh trước việc sử dụng kháng sinh trong phòng và điều trị bệnh cho gia súc. Hơn nữa, điều này cho thấy việc cần thiết phải làm các nghiên cứu về vi khuẩn học và kháng sinh đồ đối với các vi khuẩn trong dịch tử cung sau đẻ trước khi có thể đưa ra các phác đồ điều trị phù hợp.
4.4.2. Kết quả xác định tính mẫn cảm của tập đồn vi khuẩn có trong dịch viêm đƣờng sinh dục bị sữa với một số thuốc kháng sinh viêm đƣờng sinh dục bò sữa với một số thuốc kháng sinh
Chúng tôi đã làm kháng sinh đồ trực tiếp với cả tập đồn vi khuẩn có trong dịch viêm tử cung của bị mắc bệnh để chọn thuốc kháng sinh hiệu quả nhất
trong điều trị bệnh viên tử cung ở bị sữa. Từ đó, làm căn cứ để so sánh hiệu quả điều trị bệnh viêm tử cung ở bò sữa bằng thảo dược và bằng kháng sinh. Kết quả được trình bày ở bảng 4.11.
Từ kết quả xác định được ở bảng 4.11 và dựa vào bảng đánh giá đường kính vịng vơ khuẩn chuẩn cho thấy: Mức độ mẫn cảm của tập đồn vi khuẩn có trong dịch viêm tử cung âm đạo của bị với thuốc kháng sinh là khơng cao.
Trong 14 loại kháng sinh thí nghiệm chỉ có 3 loại thuốc là Amoxicillin, Norfloxacin, Tetracycline là có tỷ lệ vi khuẩn mẫn cảm từ trên 85% trở lên và đường kính vịng vơ khuẩn đạt trên 23mm.
Các loại kháng sinh Streptomycin, Colistin, Lincomycin, Tylosin hồn tồn khơng có tác dụng với vi khuẩn gây bệnh viêm tử cung, tỷ lệ mẫn cảm 0% và đường kính vịng vơ khuẩn bằng 0mm.
Bảng 4.11. Kết quả xác định tính mẫn cảm của tập đồn vi khuẩn
Tên thuốc Số mẫu kiểm tra Số mẫu mẫn cảm Tỷ lệ (%) Đƣờng kính vịng vơ khuẩn (mm) Amoxicillin 15 13 86,67 23,94 ± 0,44 Ceftiofur 15 11 73,33 19,25 ± 0,52 Enrofloxacin 15 6 40,00 17,25 ± 0,48 Norfloxacin 15 14 93,33 24,56 ± 0,32 Doxycycline 15 4 26,67 18,25 ± 0,63 Tetracycline 15 13 83,67 23,28 ± 0,45 Streptomycin 15 0 0,00 00,00 ± 0,00 Kanamycin 15 12 80,00 21,97 ± 0,34 Colistin 15 0 0,00 00,00 ± 0,00 Lincomycin 15 0 0,00 00,00 ± 0,00 Erythromycin 15 1 6,67 8,34 ± 0,71 Tylosin 15 0 0,00 00,00 ± 0,00 Floxy 15 2 13,33 15,11 ± 0,26 Tiamulin 15 2 13,33 14,73 ± 0,57
Qua đây, chúng tôi khuyến cáo để điều trị bệnh viêm tử cung bò sữa, tốt nhất nên dùng các thuốc kháng sinh Amoxicillin, Norfloxacin. Trong đó, Norfloxacin có tác dụng tốt nhất.
Tác giả Trương Quang và cs. (2008) cơng bố, có thể sử dụng Amoxicillin để điều trị bệnh do vi khuẩn Staphylococcus và Streptococcus gây ra. Nguyễn
Văn Thanh và cs. (2016) nghiên cứu thử nghiệm điều trị bệnh viêm tử cung bò cho biết Norfloxacin là một trong những thuốc có tác dụng tốt trong điều trị bệnh viêm tử cung ở bò.
Như vậy, kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với các công bố của các tác giả nêu trên trong việc đưa ra khuyến cáo nên dùng Norfloxacin để điều trị bệnh viêm tử cung ở bò sữa.
4.5. THỬ NGHIỆM SỬ DỤNG CHẾ PHẨM NGUỒN GỐC THẢO DƢỢC ĐỂ PHÕNG VÀ TRỊ BỆNH VIÊM NỘI MẠC TỬ CUNG Ở BÕ SỮA
4.5.1. Khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao dịch chiết thảo dƣợc ở các nồng độ 100 mg/ml với vi khuẩn Staphylococcus spp. và Streptococcus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò
Sau khi thu được 8 loại cao khô dược liệu sử dụng dung môi thông dụng ethanol 70%, với mục đích lựa chọn được dược liệu mục tiêu để tiến hành nghiên cứu sâu hơn từ 8 loại dược liệu ban đầu, chọn lựa 5 loại thảo dược có tác dụng tốt trong phịng và trị bệnh viêm tử cung.
Chúng tơi tiến hành thí nghiệm khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của các
loại cao khô dược liệu đối với các 02 chủng vi khuẩn Staphylococcus spp. và Streptococcus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò.
Dung môi Dimethyl Sulphoxit (DMSO) được sử dụng để pha cao khô dược liệu đến nồng độ 100 mg/ml.
Bằng phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch, 8 loại cao khơ dịch chiết có nồng độ 100 mg/ml được thử hoạt tính trên vi khuẩn Staphylococcus spp. và Streptococcus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bị. DMSO là dung mơi được
sử dụng làm đối chứng.
Bảng 4.12. Khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao dịch chiết thảo dƣợc ở các nồng độ 100 mg/ml với vi khuẩn Staphylococcus spp. và Streptococcus
spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò
S TT Dƣợc liệu Vi khuẩn Staphylococcus spp. Streptococcus spp. Đƣờng kính vịng vơ khuẩn, mm 1 Huyền diệp 22,67 ± 1,53 22,00 ± 1,00 2 Tô mộc 23,00 ± 1,73 18,33 ± 1,53 3 Đơn đỏ 21,67 ± 1,15 21,67 ± 0,58 4 Mò hoa trắng 23,00 ± 1,00 25,00 ± 1,15 5 Sài đất 25,3 ± 1,52 24,3 ± 1,52 6 Mỏ quạ 10,08 ± 1,52 11,80 ± 1,73 7 Bồ công anh 22,67 ± 1,73 23,67 ± 1,52 8 Xuân hoa 20,67 ± 1,15 21,67 ± 1,15
Kết quả thu được cho ta thấy, cả 8 loại dịch chiết thảo dược đều cho hoạt tính kháng khuẩn mạnh và khả năng kháng khuẩn của chúng là khác nhau.
Từ kết quả xác định được ở bảng 4.12 và dựa vào bảng đánh giá đường kính vịng vơ khuẩn chuẩn với nồng độ dịch chiết 100mg/ml cho kết quả đường kính vịng vơ khuẩn như sau: khả năng ức chế vi khuẩn của 8 loại thảo dược được nghiên cứu cũng tương đối cao, có khả năng sử dụng thay thế kháng sinh. Trong đó, dịch chiết của 5 loại thảo dược Mị hoa trắng, Sài đất, Bồ cơng anh, Đơn đỏ và Huyền diệp có đường kính vịng vơ khuẩn cao nhất đối với cả vi khuẩn
Staphylococcus spp. và Streptococcus spp., có tiềm năng thay thế kháng sinh
trong một số trường hợp để chữa bệnh viêm tử cung ở bị sữa vừa an tồn, vừa tránh khả năng kháng thuốc của vi khuẩn. Cụ thể: đường kính vịng vơ khuẩn đối với vi khuẩn Staphylococcus spp. và Streptococcus spp. của dịch chiết Mò hoa trắng lần lượt là 23,00 ± 1,00mm và 25,00 ± 1,15mm; của dịch chiết cây Sài đất là 25,3 ± 1,52mm và 24,3 ± 1,52mm; của dịch chiết cây Bồ công anh là 22,67 ± 1,73mm và 23,67 ± 1,52mm; của cây Đơn đỏ lần lượt là 21,67 ± 1,15mm và
21,67 ± 0,58mm; của cây Huyền Diệp lần lượt là 22,67 ± 1,53mm và 22,00 ± 1,00mm. Trong đó, cây Mị hoa trắng và cây Sài đất có tác dụng ức chế vi khuẩn tốt nhất.
Khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của chế phẩm có nguồn gốc thảo dược của chúng tôi khá tương đồng với những nhận định của tác giả Nguyễn Thị
Thanh Hà và cs. (2017) trong nghiên cứu đánh giá khả năng ức chế vi khuẩn in
vitro của cao khô 08 loại thảo dược (Huyền diệp, Tơ mộc, Đơn đỏ, Mị hoa trắng,
Sài đất, Mỏ quạ, Bồ công anh, Xuân hoa) đối với 02 chủng vi khuẩn
Staphylococcus spp. và Streptococcus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò cho
thấy, ở nồng độ 100 mg/ml các cao khô dịch chiết đều có khả năng ức chế vi khuẩn in vitro tốt đối với 02 chủng vi khuẩn. Đối với vi khuẩn Streptococcus spp, đường kính vịng vô khuẩn biến đổi từ 11,80mm (Mỏ quạ) đến 25,00mm (Mò hoa trắng). Đối với vi khuẩn Staphylococcus spp. đường kính vịng vơ khuẩn biến đổi từ 10,28mm (Mỏ quạ) đến 25,30mm (Sài đất).
Bên cạnh đó, Nguyễn Văn Thanh và Nguyễn Thanh Hải (2016) khi nghiên cứu về dược liệu Đơn đỏ cũng cho thấy, ở nồng độ 100 mg/ml các cao khô dịch chiết đều có khả năng ức chế vi khuẩn in vitro tốt đối với 02 loài vi khuẩn. Đối với vi khuẩn Streptococcus spp, đường kính vịng vơ khuẩn biến đổi từ 17,67mm (dung môi nước cất) đến 24,67mm (dung môi Chloroform). Đối với vi khuẩn
Staphylococcus spp. đường kính vịng vơ khuẩn biến đổi từ 20,67mm (dung mơi
nước cất) đến 24,00mm (dung môi Chloroform). Cao khô dịch chiết sử dụng dung mơi Chloroform khi pha lỗng ở nồng độ 0,195 mg/ml khi bổ sung vào lỗ thạch vẫn quan sát thấy vịng vơ khuẩn đối với cả 2 chủng vi khuẩn nghiên cứu.
4.5.2. Khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao dịch chiết thảo dƣợc ở các nồng độ khác nhau đối với vi khuẩn Staphylococcus spp. phân lập từ dịch
viêm tử cung bò
Nồng độ ức chế tối thiểu được hiểu là nồng độ thấp nhất của 1 kháng sinh có khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn sau khoảng 24h nuôi cấy. Xác định được nồng độ ức chế tối thiểu của kháng sinh, hay dịch chiết là một bước quan trọng trong việc lựa chọn liều điều trị trong thú y cũng như trong nhân y.
Bảng 4.13. Khả năng ức chế vi khuẩn in vitro của cao dịch chiết thảo dƣợc ở các nồng độ khác nhau đối với vi khuẩn Staphylococcus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò
Dƣợc liệu Hệ số pha loảng dịch chiết từ nồng độ gốc 100mg/ml
21 22 23 24 25 26 27 28 29 210 Nồng độ dịch chiết, mg/ml