luan an tien si TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat
2.2.6. Kỹ thuật phân tích nồng độ dioxin trong nghiên cứu
58
Phân tích nồng độ các đồng loại dioxin (GCMS) được thực hiện tại Phịng Phân tích Dioxin, Phân viện Hóa - Mơi trường, Trung tâm Nhiệt đới Việt - Nga, Bộ Quốc phịng.
Phân tích theo quy trình phân tích EPA 1613B trên thiết bị bằng sắc ký khí/khối phổ phân giải cao (HRGC/HRMS). Phòng xét nghiệm đạt tiêu chuẩn ISO/IEC 17025:2005, Số VILAS 856.
Phương pháp GC/MS được áp dụng để phân tích xác định nồng độ 17 đồng loại độc của polyclodibenzo-p-dioxin và polyclodibenzofuran (PCDD/PCDF) có trong dịch chiết từ mẫu huyết thanh. 17 đồng loại độc PCDD/PCDF xác định theo phương pháp này được liệt kê ở dưới đây:
TT Tên chất Số CAS 1 2,3,7,8-Tetraclodibenzo-p-dioxin (2,3,7,8-TCDD) 1746-01-6 2 1,2,3,7,8-Pentaclodibenzo-p-dioxin (1,2,3,7,8-PeCDD) 40321-76-4 3 1,2,3,4,7,8-Hexaclodibenzo-p-dioxin (1,2,3,4,7,8-HxCDD) 39227-28-6 4 1,2,3,6,7,8-Hexaclodibenzo-p-dioxin (1,2,3,6,7,8-HxCDD) 57653-85-7 5 1,2,3,7,8,9-Hexaclodibenzo-p-dioxin (1,2,3,7,8,9- HxCDD) 19408-74-3 6 1,2,3,4,6,7,8-Heptaclodibenzo-p-dioxin (1,2,3,4,6,7,8-HpCDD) 35822-46-9 7 1,2,3,4,6,7,8,9-Octaclodibenzo-p-dioxin (OCDD) 3268-87-9 8 2,3,7,8-tetraclodibenzofuran (2,3,7,8-TCDF) 51207-31-9 9 1,2,3,7,8-Pentaclodibenzofuran (1,2,3,7,8-PeCDF) 57117-41-6 10 2,3,4,7,8- Pentaclodibenzofuran (2,3,4,7,8-PeCDF) 57177-31-4 11 1,2,3,4,7,8-Hexaclodibenzofuran (1,2,3,4,7,8-HxCDF) 70648-26-9 12 1,2,3,6,7,8- Hexaclodibenzofuran (1,2,3,6,7,8-HxCDF) 57177-44-9 13 1,2,3,7,8,9- Hexaclodibenzofuran (1,2,3,7,8,9-HxCDF) 72918-21-9 14 2,3,4,6,7,8- Hexaclodibenzofuran (2,3,4,6,7,8-HxCDF) 60851-34-5 15 1,2,3,4,6,7,8-Heptaclodibenzofuran (1,2,3,4,6,7,8-HpCDF) 67562-39-4 16 1,2,3,4,7,8,9- Heptaclodibenzofuran (1,2,3,4,7,8,9-HpCDF) 55673-89-7 17 1,2,3,4,6,7,8,9-Octaclodibenzofuran (OCDF) 39001-02-0 * Thiết bị sắc ký khí khối phổ:
59
- Thiết bị sắc ký khí (GC): Thiết bị sắc ký khí của Agilent, model 7890A, được đặt được chương trình nhiệt độ, tốc độ và áp suất, có thể bơm mẫu theo kỹ thuật chia và khơng chia dịng, thiết kế phù hợp với các loại cột sắc ký khí mao quản.
- Thiết bị khối phổ (MS): Khối phổ phân giải cao AutoSpec Premier M834 của hãng Waters có thể sử dụng chế độ phân tích SIM hoặc SCAN. Năng lượng bắn phá phân tử là 70eV. Detecto khối phổ độ phân giải cao (≥10.000) được ghép nối với GC qua Interface, đặt được nhiệt độ.
- Hoạt động của GC/MS thực hiện theo chương trình đã lập sẵn, được điều khiển bằng máy tính qua phần mềm MassLynx, định lượng các chất PCDD/PCDF bằng phần mềm TargetLynx.
* Quy trình tóm tắt:
- Chiết mẫu, làm sạch và làm giàu mẫu theo quy trình. - Xác định hàm lượng lipid.
- Làm sạch trên cột silicagel.
- Làm sạch trên cột florisil (đây là phần tùy chọn vì nền mẫu serum tương đối sạch).
- Tách phân đoạn chứa PCDD/PCDF trên cột nhôm oxit. - Cơ đặc dung mơi trước khi phân tích trên thiết bị. - Phân tích trên thiết bị HRGC/HRMS.
- Tính nồng độ độc tương đương TEQ.
Do dioxin có tính ái mỡ cao (lipophilic) nên khi định lượng dioxin trong các mẫu phẩm sinh học, thành phần mỡ trong mẫu sẽ được tách ra và định lượng. Việc tách mỡ giúp cho tính nồng độ theo lượng mỡ tách được chính xác. Cơng đoạn tách mỡ có thể tiến hành bằng hệ thống máy tự động, hoặc thủ cơng. Nhìn chung, hiệu suất tách mỡ của hai phương pháp tự động và thủ cơng là khơng có sự khác biệt đáng kể.
60
Chất nội chuẩn bao gồm 17 đồng loại dioxin và 14 đồng loại PCB với nồng độ pha loãng của mỗi đồng loại là 1 pg/µl (riêng nồng độ của OCDD và OCDF là 2 pg/µl ). Các đồng loại này được đánh dấu bằng đồng vị Cacbon 13 (C12-labeled congeners). Thể tích chất nội chuẩn cho vào mỗi mẫu là 20 µl.
HUYẾT THANH (25ml)
Chất nội chuẩn