TEQ=∑ [C PCDDi×TEFi ]+ ∑ n2 [C PCDFi×TEFi ]
2.2.7. Kỹ thuật định lượng nồng độ hormone trong nghiên cứu
Các hormone được định lượng bằng hệ thống miễn dịch Hóa phát quang cơng nghệ Ester Acridinium của máy xét nghiệm miễn dịch tự động ADVIA Centaur® CP, SIEMENS, Đức.
Hóa chất chính hãng sử dụng cho máy xét nghiệm được nhập khẩu từ Mỹ, sản xuất tại Siemens Healthcare Diagnostics Inc. 511 Benedict Avenue Tarrytown, NY 10591 USA.
Hóa chất dùng cho máy xét nghiệm Mã lô (Batch code/LOT number)
TES 56260026 FSH 70750238 LH 58169229 PRL 51543182 TSH 67378340 FT3 59700249 FT4 34110150
Xét nghiệm định lượng nồng độ các hormone trong nghiên cứu được thực hiện tại Phòng Xét nghiệm Protein – Độc chất – Tế bào (D3) thuộc Viện nghiên cứu Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y.
Các hormone liên quan đến trục HPT bao gồm: TSH, FT3, FT4.
Các hormone liên quan đến trục HPG bao gồm: PRL, FSH, LH, Testosterone.
Nồng độ hormone sử dụng đơn vị nồng độ khối lượng theo Hệ SI.
65
Theo hướng dẫn của hãng thì phạm vi tham chiếu về giá trị nồng độ bình thường của các hormone trên như sau (tương ứng với bộ Kit hóa chất mà hãng sử dụng):
TSH: 0,35 – 5,5 μIU/mL; FT3: 2,3 – 4,2 pg/mL; FT4: 0,89 – 1,76 ng/mL;
PRL: 2,1 – 17,7 ng/mL (nam giới trưởng thành); LH: 1,5 – 9,3 mIU/mL (nam giới, 20 – 70 tuổi); FSH: 1,4 – 18,1 mIU/mL (nam giới, 13 – 70 tuổi);
Testosterone: 164,94 – 753,38 ng/dL (nam giới < 50 tuổi).
Hình 2.4. Hình ảnh thực hiện xét nghiệm định lượng nồng độ các hormone trên máy xét nghiệm miễn dịch tự động
ADVIA Centaur® CP, SIEMENS, Đức
* Nguồn: Tác giả chụp tại Phòng xét nghiệm Protein - Độc chất - Tế bào (D3), Tầng 3, Viện nghiên cứu Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y
66
Quy trình tiến hành xét nghiệm định lượng hormone trên Hệ thống máy xét nghiệm miễn dịch tự động ADVIA Centaur® CP, SIEMENS:
- Bật máy, khởi động máy và phần mềm.
- Cài đặt hóa chất vào máy và kiểm tra chất lượng thuốc thử trước khi xét nghiệm. Hệ thống sẽ tự động nhận dạng thuốc thử bằng mã vạch, kiểm tra hiệu lực của calibration, hạn dùng của thuốc thử và đưa ra cảnh báo.
- Chạy chương trình Calibrator. - Chạy chương trình QC để kiểm tra.
- Hệ thống tự kiểm tra chất lượng mẫu: phát hiện thiếu thể tích mẫu, cục máu đơng, bọt nếu có và đưa ra cảnh báo.
- Chạy mẫu theo mã đối tượng nghiên cứu.
Kết quả xét nghiệm được hệ thống máy tự động lưu trữ chính xác theo ngày giờ thực hiện và in ra kết quả khi cần.
* Nguyên lý định lượng nồng độ hormone theo phương pháp miễn dịch Hóa phát quang (CLIA):
CLIA dựa trên nguyên lý kháng nguyên (chất có trong mẫu bệnh phẩm) kết hợp với kháng thể (chất có trong thuốc thử) có gắn chất đánh dấu (thường là phân tử Acridinium Ester).
Nhờ chất đánh dấu có khả năng phát quang khi thay đổi pH của dung dịch phản ứng và tín hiệu phát quang được khuếch đại qua một ống nhân quang nên có thể định lượng các chất có nồng độ rất thấp hoặc các chất bất thường trong cơ thể với độ chính xác rất cao so với các kỹ thuật khác.
Phân tử Acridinium ester có trọng lượng phân tử nhỏ hơn rất nhiều so với các enzyme trong phản ứng ELISA do đó tăng khả năng thâm nhập vào cơ chất và giảm thiểu hiệu ứng che lấp trung tâm hoạt động của kháng nguyên và kháng thể giúp cho độ chính xác tăng đáng kể so với phương pháp ELISA (đặc biệt khi định lượng những chất có nồng độ thấp).
67