3.6.2. Quy trình ni cấy vi tảo biển
Quy trình ni cấy vi tảo được thể hiện hình 3.23. Giống vi tảo thuần khiết
được lưu trữ, bảo quản tại phịng Sinh học Tảo, Viện Vi sinh vật và Cơng nghệ Sinh
học, Đại học Quốc Gia, Hà Nội và cung cấp giống cho hệ thống nuôi cấy.
3.6.2.1. Nhân nuôi giống gốc (nuôi cấy vô trùng, không cần sục khí)
Dung dịch giống vi tảo thuần khiết (20-100ml) từ phịng Sinh học Tảo, Viện Vi sinh vật và Cơng nghệ Sinh học được chuyển xuống trại giống. Nguồn giống này
được lưu giữ trong điều kiện nhiệt độ ổn định 20°C, chiếu sáng nhân tạo (đèn neon)
trong thời gian 3 ngày. Sau đó được sử dụng cho nhân nuôi giống gốc tại trại sản xuất giống trong các bình tam giác 100ml, 250ml hoặc 500ml. Các bình ni cấy và
mơi trường được khử trùng ở 121°C trong 15 phút. Tuy nhiên nếu khơng có nồi khử
trùng chuyên dụng có thể sử dụng các thiết bị bếp gas hoặc điện để khử trùng, các bình chứa mơi trường có nắp đậy bằng màng nhơm giữ trong nước nóng 70-80°C, thời gian 30 phút. Môi trường dinh dưỡng trong bình khơng nên đun sơi vì như thế sẽ làm thay đổi giá trị dinh dưỡng của mơi trường. Mục đích của khử trùng nhằm giảm thiểu nguy cơ nhiễm các mầm bệnh và các loài tảo khác trong bình trước khi bắt đầu ni cấy.
Cấy chuyển giống là cần thiết cho lưu giữ giống vi tảo trong thời gian dài, nhằm mục đích đáp ứng đủ về số lượng, thành phần và kịp thời giống cho quá trình sản xuất. Nhiễm khuẩn có thể xảy ra bất kể lúc nào trong quá trình ni cấy, gây
ảnh hưởng lớn đến các giai đoạn sản xuất tiếp theo. Vì vậy, việc cấy chuyển giống nên được tiến hành trong tủ cấy vô trùng để giảm khả năng nhiễm khuẩn từ khơng
khí. Rất ít các trại giống có tủ cấy nên có thể thay thế bằng cách thực hiện trong một buồng kín đơn với trần mở hoặc khoảng làm việc phân vùng với đèn cồn hoặc đèn Bunsen (gas). Việc cấy chuyển phải được thực hiện cẩn thận, tránh tiếp xúc bề mặt khi cấy chuyển từ bình này sang bình khác. Giống ni cấy ở giai đoạn này có thể
lưu giữ từ 7-14 ngày phụ thuộc vào nhiệt độ và nuôi cấy trong điều kiện ánh sáng
yếu 500-1000 Lux. Tiến hành cấy chuyển 1- 10ml giống thuần khiết sang các bình tam giác 100-500 ml chứa môi trường dinh dưỡng. Giai đoạn này chủ yếu là ni
cấy tĩnh khơng cần sục khí, lắc đều 2 lần mỗi ngày.
3.6.2.2 Nhân nuôi giống cấp 1 (ni cấy vơ trùng, sục khí)
bình thể tích 2-5 lít để tạo giống cấp 1 (hình 3.24). Mục đích là giai đoạn nuôi cấy
này làm gia tăng mật độ tế bào vi tảo (trong khoảng 8-15 × 106tế bào/ml). Nuôi cấy
ở nhiệt độ 20-22°C, tăng cường chiếu sáng 4.000 Lux, sục khí liên tục và định kỳ
bổ sung khí CO2.