Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. Khả năng ăn và tiêu hóa 6 vi tảo của ấu trùng trai ngọc
Kích thước tế bào, khả năng tiêu hóa, sự hấp thu được các chất dinh dưỡng trong vi tảo là một trong những yếu tố quyết định sự tồn tại và phát triển của ấu trùng [9]. Do vậy, Lucas và Rangel đã nghiên cứu và cho thấy kính hiển vi huỳnh quang có hiệu quả trong việc phát hiện quá trình ăn và tiêu hóa vi tảo của ấu trùng [25]. Các nghiên cứu khác cũng chỉ ra rằng không phải ấu trùng trai ngọc nào cũng có thể dễ dàng ăn hay tiêu hóa tất cả các loài vi tảo [11], thực tế là chúng có thể ăn các loài vi tảo nhưng không có nghĩa chúng có thể tiêu hóa được hết.
Nhiều loài vi tảo đã được thử nghiệm nuôi ấu trùng trai ngọc, tuy nhiên không thể biết khi nào chúng được ăn hoặc tiêu hóa. Mục đích của nghiên cứu này là xác định những loài vi tảo nào mà ấu trùng trai ngọc ở các giai đoạn khác nhau có
thể ăn và tiêu hóa được để thiết kế một chế độ ăn thích hợp cho ấu trùng.
Sáu loài vi tảo dùng cho thí nghiệm cho ăn và tiêu hóa ở ấu trùng sử dụng kính hiển vi huỳnh quang Zeiss Axio Vision ở độ phóng đại 400 – 1000 lần. Thử nghiệm được tiến hành trên ấu trùng P. sterna 2, 4, 5 (ấu trùng thẳng - bản lề), 10 và 22 ngày tuổi (giai đoạn có mấu, giai đoạn ấu trùng umbo) sau khi thụ tinh. 30 mẫu ấu trùng nuôi trong 50ml Guillard F/2 trong cốc thủy tinh 200 ml. Số lượng 105 tế bào vi tảo/ml. Cỏc loài vi tảo được theo dừi riờng biệt. Sự quan sỏt được tiến hành từ 1 đến 2 giờ để phân tích giai đoạn tiêu hóa và không tiêu hóa.
Một nhóm ấu trùng không cho ăn dùng làm đối chứng.
Kết quả được trình bày ở bảng 3.1 và 3.2
Bảng 3.1. Quan sát khả năng ăn và tiêu hóa của ấu trùng trai ngọc sau 1 giờ Các giai đoạn Huỳnh quang Mô tả đặc điểm tiêu hóa
(I) Ăn Màu đỏ Toàn bộ các tế bào được xác
định rừ trong dạ dày
(II) Tiêu hóa Hồng nhạt, vàng hoặc vàng da cam
Các tế bào vi tảo trong dạ dày được phân giải
(III) Trống Không phát huỳnh quang Dạ dày trống: ấu trùng không ăn hoặc đã tiêu hóa hết
Bảng 3.2. Khả năng ăn và tiêu hóa 6 vi tảo của ấu trùng trai ngọc sau thời gian 1-2 giờ sau lọc rửa ấu trùng theo thời gian sinh trưởng của ấu trùng
Tuổi ấu trùng
(ngày) 2 4 5 10 22
Thời gian (giờ) 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
Chaetoceros VĐ01 I I I II I II II II II II
Chlorella VĐ02 - - - - I I I II II II
Isochrysis VĐ03 I II II III II III II III II III
Tuổi ấu trùng
(ngày) 2 4 5 10 22
Thời gian (giờ) 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
Nannochloropsis VĐ04 I II I II II II II II II III
Navicula VĐ05 - - - I I I I
Tetraselmis VĐ06 - - - I I II II
Ghi chú: (I) ăn ; (II) tiêu hóa; (III) tiêu hóa hết
Ở bảng 3.1, 3. 2 và hình 3.7 xác định quá trình ăn và tiêu hóa ở các giai đoạn được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang sau 1 và 2 giờ ăn. Trên thực tế, sự tiêu hóa được quan sát theo kiểu đọc các màu sắc khác nhau (màu hồng, da cam hay vàng) bằng kính hiển vi thông thường có thể dẫn đến nhầm lẫn. Ăn được định nghĩa như là giai đoạn khi ấu trựng thể hiện huỳnh quang rừ bờn trong. Cỏc loài Nannochloropsis VĐ04 nhanh chúng được ấu trùng ăn có lẽ do kích thước của chúng nhỏ (khoảng 1.2 - 2m). Thu được kết quả tương tự đối với hai loài Isochrysis VĐ03 và Navicula VĐ05.
Với các loài vi tảo khác, các vấn đề liên quan đến kích thước vật lý (hình dạng và kích cỡ) của các tế bào là nguyên nhân cản trở ấu trùng trai ngọc ăn, trong hầu hết giai đoạn đầu của ấu trùng dưới 10 ngày tuổi. Các tế bào tròn lớn giống như Tetraselmis VĐ06 (đường kính tới 7 - 10.3m), loài Chaetoceros VĐ01 lông gai và Chlorella VĐ02 có thể đã cản trở ấu trùng ăn và kết quả này phù hợp với báo cáo của Lucas và Watson, các nghiên cứu chỉ ra rằng các vi tảo này là thức ăn thích hợp với ấu trùng giai đoạn sau 10 ngày tuổi. Kỹ thuật huỳnh quang đã chứng minh việc sử dụng 6 loài vi tảo để nuôi ấu trùng hình D và giai đoạn ấu trùng umbo của trai ngọc là có hiệu quả vì tuổi là yếu tố quan trọng trong việc thực hiện tiêu hóa.
Nghiên cứu hiện tại xác nhận sự lựa chọn khẩu phần thức ăn là thực sự tốt, khi trong khẩu phần có chứa hỗn hợp các vi tảo có kích cỡ khác nhau như Nannochloropsis, Isochrysis, Chaetoceros, Navicula, Tetraselmis, Chlorella các loại vi tảo này phù hợp nhiều hơn so với các vi tảo khác.
Trong nghiên cứu tiếp theo, 6 vi tảo Chaetoceros VĐ01, Chlorella VĐ02, Isochrysis VĐ03, Nannochloropsis VĐ04, Navicula VĐ05, Tetraselmis VĐ06 được xác định và phân tích trình tự rADN 18S. Để xác định chúng thuộc loài nào thuộc
các chi Chaetoceros, Chlorella, Isochrysis, Nannochloropsis, Navicula và Tetraselmis. Đây là các vi tảo là thức ăn tươi sống quan trọng trong sinh trưởng và phát triển của của ấu trùng.
Hình 3.7. Quan sát dưới kính hiển vi giai đoạn ấu trùng trai ngọc ăn vi tảo (ì 100)
3.3. Phân tích giải trình tự 18S rADN 6 chủng vi tảo biển