Theo nghiên cứu của L Thị Bích Thủy và cs (2006), ở 40oC, hoạt tính enzyme là cao nhất (100%) và không đổi trong các khoảng thời gian 10- 60 phút. Ở các nhiệt độ 50o
C và 60oC, hoạt tính enzyme giảm dần và giảm nhanh hơn theo thời gian đối với 60oC (hoạt tính cịn 65% sau 60 phút ủ). Ở 70oC, hoạt tính enzyme cịn 20% sau 60 phút ủ và mất hoàn toàn ở 80oC sau 50 phút ủ [4]. Nhƣ vậy, kết quả cho thấy, enzyme rLK kém bền với nhiệt hơn so với enzyme tách chiết từ tự nhiên. Khả năng kém bền của enzyme có thể liên quan đến mức độ glycosyl hóa thấp hoặc biểu hiện trong các hệ biểu hiện khác nhau. Ví dụ nhƣ, N-glycosyl hóa của cycloinulo- oligosaccharide fructanotransferase làm thay đổi mức độ bền nhiệt của enzyme biểu hiện trong S. cerevisiae [36]. Các nghiên cứu khác cũng chứng minh vai trò tƣơng tự của glycosyl hóa trong protein bền nhiệt [39,61].
3.4.2. Ảnh hƣởng của pH lên hoạt tính và độ bền enzyme rLK
pH mơi trƣờng ảnh hƣởng đến trạng thái ion hóa các gốc hydrocacbon của các acid amin trong ph n tử enzyme, ion hóa các nhóm chức trong trung t m hoạt động, ion hóa cơ chất, do đó ảnh hƣởng đến hoạt độ của enzyme. Nghiên cứu ảnh hƣởng của pH đến hoạt tính rLK, dịch enzyme rLK đƣợc pha trong các đệm 20 mM acetate (pH 3- 5,5), phosphate (pH 6- 8) và tris- HCl (pH 8,5- 11), để ổn định ở
nhiệt độ phòng trong 30 phút, nhỏ dịch lên đĩa fibrin, ủ 37oC trong 5 giờ và xác định hoạt tính cịn lại. Mẫu đối chứng là các đệm với các giá trị pH tƣơng ứng không chứa enzyme rLK.
Nhận thấy, khi tăng pH từ 3- 6, hoạt tính enzyme tăng dần. Hoạt tính enzyme cao nhất trong khoảng pH từ 7- 8 (hoạt tính tƣơng đối là 100%). Hoạt tính enzyme giảm nhanh khi pH tăng từ 8,5- 11 (hoạt tính cịn lại 6% ở pH 11). Nhƣ vậy, enzyme hoạt động tối ƣu trong khoảng pH từ 6,5- 8 (Hình 3.16).
So sánh với kết quả nghiên cứu của Cho và cs (2004), đối với enzyme LK tách chiết từ giun đất L. rubellus, tại pH 2, hoạt tính enzyme mất hồn tồn, hoạt tính cịn 70- 80% tại pH 3 và pH 12, 90% ở pH 9-11, khoảng pH tối ƣu là 7-8 [12]. Nhƣ vậy, rLK theo nghiên cứu của chúng tôi hoạt động trong khoảng pH tƣơng đồng với enzyme tách chiết từ tự nhiên.