CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.3. KHÁI QUÁT VỀ ENZYME LUMBROKINASE
1.3.2. Tình hình nghiên cứu lumbrokinase ở Việt Nam
Việt Nam là nƣớc có khí hậu nóng ẩm, thích hợp cho nhiều lồi giun đất phát triển nên có số lƣợng rất lớn các loài giun đất [5]. Nhờ sự phát triển của cơng nghệ sinh học, hiện nay đã có nhiều cơng trình nghiên cứu về các sản phẩm chống đơng máu, đặc biệt là các sản phẩm tách chiết từ các lồi giun có sẵn trong nƣớc. Nhóm nghiên cứu của PGS. TS. Nguyễn Thị Ngọc Dao và cs (2006) đã thực hiện đề tài cấp cơ sở Viện CNSH “Tách dịng và tìm điều kiện biểu hiện gen mã hóa cho
đƣợc các lồi giun đất có hoạt tính thủy ph n fibrin cao và bƣớc đầu tìm cách nh n dịng trình tự gen mã hóa LK từ lồi giun quế Perionyx excavatus.
L Thị Bích Thủy và cs (2004, 2006) đã tinh sạch enzyme có hoạt tính thủy ph n fibrin từ P. excavatus và đánh giá đƣợc một số tính chất của nó [4]. Phan Thị Bích Tr m (2008) cũng đã tách chiết và tinh sạch enzyme thủy ph n fibrin từ P. excavatus và tách chiết đƣợc 8 ph n đoạn có hoạt tính thủy ph n fibrin cao [6] .
Hầu hết các nghiên cứu ở trong nƣớc mới chỉ dừng lại ở mức độ tinh sạch, đánh giá tính chất l hóa của LK từ giun đất, rất ít các nghiên cứu đề cập đến LK tái tổ hợp. Năm 2013, Bùi Phƣơng Linh và cs đã nh n dịng và biểu hiện thành cơng gen mã hóa LK từ giun đất L. rubellus ở E. coli. Trong nghiên cứu này, gene mã
hóa LK từ lồi giun L. rubellus (AB045720) trên GenBank đƣợc tối ƣu hóa codon. Gen lk có chứa 747 bp, mã hóa cho 238 aa. Gen đƣợc tạo dòng trong vector pET22b(+) và biểu hiện trong E. coli BL21(DE3)pLysE, bƣớc đầu có hoạt tính thủy ph n fibrin cao so với chuẩn plasmin (Sigma). Sau cảm ứng IPTG 1 mM, xuất hiện băng protein chiếm đến 92% protein tổng số và tăng dần ở các thời gian cảm ứng khác nhau, đạt cực đại ở 6 giờ sau cảm ứng. Nhận dạng Maldi-Tof đã khẳng định protein biểu hiện chính là LK [3].