Chương 2 : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.6. Phương pháp khối phổ
Nguyên tắc: Phương pháp khối phổ (Mass Spectrometry – MS) là một kỹ thuật
phân tích hóa học giúp xác định hàm lượng và loại chất hóa học có trong một mẫu bằng cách đo tỉ lệ khối lượng trên điện tích và số lượng của các ion pha khí. Đây là kỹ thuật phân tích đo phổ về khối lượng của các phân tử điện khi chúng di chuyển trong điện trường. Mẫu được ion hóa trở thành các phân tử tích điện khác nhau và được phân tách dựa vào sự sai khác về giá trị m/z. Dữ liệu khối phổ được tự động ghi lại. Khối phổ hiện là một trong những công cụ linh hoạt và nhạy nhất áp dụng cho đặc tính cấu trúc của các chất chuyển hóa thứ cấp được phân lập từ thực vật bao gồm các flavonoids [41].
ESI (ElectroSpray Ionization) là thuật ngữ chỉ phương pháp ion hóa mẫu bằng phương pháp phun chum ion trong dung dịch tạo thành đám sương mù với các giọt nhỏ dễ bay hơi. Cơ chế hoạt động của nguồn ESI khá đơn giản. Dưới áp lực dịng liên tục, đường kính cột bé và hiệu điện thế cao (2500 V), mẫu sẽ được phun tơi thành các giọt nhỏ đa điện tích ra khỏi đầu kim phun. Kim phun sẽ tạo thành các giọt nhỏ, như đám sương mù (đám mây khí ion), dễ bay hơi, các giọt này chứa mẫu và các thành phần dung mơi khác. Q trình bay hơi được thực hiện bởi nhiệt độ hoặc màng chắn khí nitơ (curtain gas) làm cho mẫu dễ bay hơi. Kết quả là chỉ cịn mẫu tích điện và bay vào bộ phận phân tích khối của máy khối phổ (hình 2.2).
Hình 2.2. Sơ đồ minh họa hoạt động của hệ ESI-MS/MS
Mục đích: Xác định phổ khối lượng và đặc trưng cấu trúc của hợp chất cần quan
tâm, kết hợp với kết quả phổ NMR để xác định được tên, cấu tạo của hợp chất.
Quy trình:
Cân 5 mg mẫu phân tích, hịa tan trong methanol (dùng cho phân tích HPLC), thu được dung dịch với nồng độ 10 µg/ml.
Đo phổ khối lượng với nguồn ion hóa mẫu bằng phương pháp phun chùm ion (ESI-MS) được thực hiện trên thiết bị LTQ-Orbitrap XL (ThermoFisher Scientific) tại Khoa Toán học và Khoa học sự sống, ĐH Khoa học tự nhiên, ĐH Hiroshima. Phổ khối ESI được đặt trong giá trị m/z 150-2000, điện áp mao dẫn và điện áp hình nón ESI lần lượt được đặt ở mức 4,5 kV và 50V, với nguồn hoạt động ở chế độ ion dương. Phổ khối được ngoại chuẩn bằng dung dịch natri trifluoro acetate (JEOL) và được xử lý bằng phần mềm Xcalibur.
Đánh giá kết quả: Kết hợp kết quả phân tích phổ MS với phổ NMR, xác định
thành phần hóa học, cơng thức cấu tạo, tên của hợp chất.