Chương 2 : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.8. Phương pháp bắt gốc tự do DPPH
Nguyên tắc: Đây là một phương pháp nhanh chóng, đơn giản và rẻ tiền để đo
lường khả năng chống oxi hóa của các hợp chất liên quan đến việc sử dụng gốc tự do 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) – được sử dụng rộng rãi để kiểm tra khả năng của các hợp chất hoạt động như các gốc tự do hoặc chất cho hydro để đánh giá hoạt động
chống oxi hóa. Phương pháp bắt gốc tự do DPPH dựa trên nguyên lý khử DPPH, một gốc tự do ổn định. Gốc tự do DPPH với một electron đơn lẻ cho phép hấp thụ cực đại ở 517 nm (màu tím). Khi chất chống oxi hóa phản ứng với DPPH, một gốc tự do ổn định sẽ được ghép nối với sự hiện diện của một chất cho hydro và khử thành DPPH-H và kết quả là độ hấp thụ giảm. Khi chuyển sang dạng DPPH-H, màu tím chuyển thành màu vàng (sau khi bị khử) tương ứng với số lượng electron bị bắt. Màu càng vàng càng thể hiện hoạt tính bắt gốc tự do tốt [39].
Mục đích: Kiểm tra hoạt tính bắt gốc tự do DPPH của các hợp chất tách chiết từ
nụ hoa hịe khơ.
Quy trình:
Chuẩn bị hóa chất DPPH: Cân 4,3 mg DPPH, hòa tan với 3,3 ml Methanol trong ống nghiệm đã bọc kín bằng giấy bạc.
Chuẩn bị các dung dịch xây dựng đường chuẩn Vitamin C: Hòa tan 1mg Vitamin C trong 1ml Methanol, thu được dung dịch Vitamin C nồng độ 1000 µg/ml. Sau đó pha lỗng thành dải nồng độ 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 µg/ml đựng trong các ống Eppendorf được bọc giấy bạc.
Chuẩn bị các dung dịch chất chuẩn quercetin, rutin và các chất tách chiết được từ dịch chiết nụ hoa hịe khơ trong dải nồng độ từ 100 µg/ml đến 10000 µg/ml. Đo mẫu chuẩn (control): 600 µl Methanol + 30 µl DPPH vào ống eppendorf,
mang đi đo tại bước sóng 517 nm.
Dựng đường chuẩn vitamin C: 10 µl dung dịch vitamin C + 590 µl methanol + 30 µl DPPH, mang đo tại bước sóng 517 nm.
Đo mẫu thử nghiệm: 20 µl mẫu thử nghiệm + 580 µl methanol + 30 µl DPPH, mang đo tại bước sóng 517 nm.
Đánh giá kết quả:
Hoạt tính bắt gốc tự do DPPH được tính tốn bằng cách sử dụng cơng thức sau: % Hoạt động = [(Acontrol – Amẫu thử nghiệm)/Acontrol] × 100
Trong đó: Acontrol là giá trị đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn
Amẫu thử nghiệm là giá trị đo độ hấp thụ của mẫu thử nghiệm