Sau khi thu được các phân đoạn chất khác nhau, để xác định số lượng các chất có trong các phân đoạn này, chúng tơi sử dụng phương pháp sắc ký bản mỏng với hệ dung môi khai triển ethyl acetate/ethanol/acetic acid 25 mM = 4/1/1, thu được kết quả trong bảng 3.2.
Bảng 3.2. Kết quả sắc ký bản mỏng các phân đoạn thu được sau khi chạy sắc ký cột
STT Tên phân đoạn Số lượng (chất) Giá trị Rf
1 C1 1 0,95 2 C2 1 0,89 3 C3 1 0,73 4 C4 1 0,68 5 C5 2 0,60 và 0,50 6 C6 1 0,50
Sau khi cô quay thu hồi dung môi từng phân đoạn chất thu được, vì nồng độ thấp nên các phân đoạn 1,3,4 và 5 khơng tạo được thành dạng bột. Chỉ có phân đoạn 2 và 6 (tương ứng với chất C2 và C6) lần lượt tạo thành bột có màu vàng xanh và vàng tươi.
Khi so sánh giá trị Rf của các chất thu được với hai chất chuẩn quercetin và rutin, chúng tôi thu được chất C2 và chất C6 có giá trị Rf lần lượt bằng với giá trị Rf của querctin chuẩn và rutin chuẩn (hình 3.3).
3.1.3. Tinh sạch chất bằng phương pháp sắc ký lỏng-lỏng
Dựa vào sự phân bố của các chất trong các dung môi là khác nhau và khả năng tạo tủa được quan sát trong q trình làm thí nghiệm. Chúng tơi sử dụng phương pháp chiết lỏng-lỏng để thu được một chất kết tủa có màu vàng tươi (hình 3.4).
Hình 3.3. Kết quả sắc ký bản mỏng các chất C2 và C6 khi so sánh với quercetin và rutin chuẩn
Sau khi so sánh với giá trị Rf của quercetin và rutin chuẩn, nhận thấy chất kết tủa thu được có giá trị Rf bằng với giá trị Rf của Rutin chuẩn. Kết hợp với phương pháp sắc ký cột cổ điển, chúng tôi thu được bảng tổng kết về lượng các chất thu được từ dịch chiết nụ hoa hoè (bảng 3.3).
Bảng 3.3. Tổng kết các chất tinh sạch và cao khơ thu được từ dịch chiết nụ hoa hịe
Mẫu hoa hịe (mg) Cao khơ (mg) C2 (mg) C6 (mg) 20000 3006 45 287 20000 2195 40 277 20000 2267 35 215 Trung bình 2489 40 260
Trung bình khối lượng cao khơ sau khi cô quay thu hồi dung môi chiếm khoảng 12,45% khối lượng mẫu ban đầu. Sau khi phân tách cao khô bằng phương pháp sắc ký cột cổ điển và sắc ký lỏng-lỏng, thu được hai chất C2 và C6 lần lượt chiếm khoảng 0,2% và 1,3% khối lượng mẫu ban đầu. Hai chất C2 và C6 là hai hợp chất chính thu được từ mẫu hoa hịe khơ, để xác định thành phần hóa học và cấu trúc của hai chất này,