Chương 2 : NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.7. Phương pháp chuẩn bị mẫu β-amyloid và các dung dịch chất chuẩn,
chất tinh sạch
Nguyên tắc: Bệnh Alzheimer là nguyên nhân hàng đầu gây mất trí nhớ ở người
già. Bệnh lý được đặc trưng bởi sự hiện diện của mảng β-amyloid và mất nơron thần kinh trong mô não của những người bị ảnh hưởng. Vì vậy các thí nghiệm sinh lý và
độc tính đều sử dụng mơ hình mơ tả sự hình thành sợi và dạng oligomer của β-amyloid, thường bao gồm việc chuẩn bị mẫu ở dạng monomer. Thực tế, trong lịch sử nghiên cứu β-amyloid, NaOH đóng một vai trị nổi bật trong việc hòa tan các mảng β-amyloid. Về mặt lý thuyết, môi trường pH kiềm chênh lệch nhiều so với pI của β-amyloid, nghĩa là lực đẩy tích điện sẽ can thiệp vào các tương tác bên trong và giữa các phân tử dẫn đến việc gấp và lắp ráp monomer và đạt sự cân bằng dưới dạng monomer.
Mục đích: Chuẩn bị dung dịch β-amyloid dưới dạng monomer trong dung môi
thông thường, dễ bảo quản, dễ thực hiện các thí nghiệm tiếp theo. Chuẩn bị các dung dịch chất chuẩn, chất tinh sạch với nồng độ thích hợp.
Quy trình:
Dung dịch peptide β-amyloid 1-42: được chuẩn bị bằng cách hòa 1 mg bột peptide với 2,2 ml dung dịch NaOH 0,01 M, thu được dung dịch peptide có nồng độ 0,1 mM trong NaOH. Bảo quản ở điều kiện -20oC khi chưa sử dụng đến. Hòa với đệm PBS để đạt nồng độ mong muốn khi tiến hành thí nghiệm.
Dung dịch chất chuẩn: Cân lần lượt 3,02 mg và 6,10 mg quercetin và rutin chuẩn vào hai ống Eppendorf riêng rẽ. Hòa tan chất chuẩn bằng dung môi DMSO, đạt chất chuẩn nồng độ 1 mM. Tiếp tục pha loãng dung dịch chất chuẩn ra 10 lần và 100 lần bằng nước, thu được các nồng độ 100 µM và 10 µM.
Dung dịch chất tinh sạch: Cân lần lượt 3,02 mg chất C2 và 6,10 mg chất C6 vào hai ống Eppendorf riêng rẽ. Hịa tan chất chuẩn bằng dung mơi DMSO, đạt chất chuẩn nồng độ 1 mM. Tiếp tục pha loãng dung dịch chất chuẩn ra 10 lần và 100 lần bằng nước, thu được các nồng độ 100 µM và 10 µM.