Phương pháp nghiên cứu

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tổng hợp và ứng dụng polylactic acid (Trang 76 - 80)

Chương 2 : THỰC NGHIỆM

2.3. Phương pháp nghiên cứu

2.3.1. Nghiên cứu cấu trúc

- Cấu trúc và thành phần của, poly-axit lactic, copolyme được xác định bằng máy cộng hưởng từ hạt nhân phân giải cao 500 MHz (ADVANCE - 500). Hãng sản xuất: Bruker (Đức – Thụy Sỹ), tại Viện Hóa Học.

- Khối lượng phân tử của copolyme được đo bằng máy sắc ký thấm gel (GPC) ở 400C sử dụng một hệ thống GPC TOSOH HLC-8220 với cột HM-H và dung môi cloroform (0,6 ml min-1). Độ phân tán tiêu chuẩn polystyren với Mn từ 5,0 * 102 đến 1,11 * 106 được sử dụng để kiểm tra.

- Thành phần cặn Sn dư trong mẫu PLLA được đo bằng máy đo phổ phát xạ hấp thụ nguyên tử AA-6500F. Các mẫu được phân hủy trong dung dịch amoniac 25% và hòa tan trong dung dịch HCl 1M sau đó được đo AA.

- Phổ hồng ngoại (FT-IR) của các mẫu lactide, poly-axit lactic, copolyme được ghi trên máy phổ hồng ngoại biến đổi Fourier Nexus của Mỹ, trong dải sóng từ 4000 – 400 cm-1, độ phân giải 4 cm-1, số lần quét 16 lần, ở điều kiện chuẩn tại Viện Kỹ thuật nhiệt đới, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

2.3.2. Nghiên cứu hình thái học, tính chất nhiệt, cơ lý

- Hình thái học được quan sát bằng hệ Kính hiển vi điện tử quét SEM và kính hiển vi điện tử truyền qua TEM

- Máy đo tính chất cơ lý Zwick Z2.5 (Zwick, Đức).

- Phép phân tích nhiệt vi sai (DSC) được thực hiện trên máy LABSYS evo

2.3.3. Gia công

- Hệ electrospinning

- Tốc độ thẩm thấu khí oxy của màng PLA và PLA-clay nanocomposite được đo theo phương pháp áp suất cố định ASTM D 1434 trên máy Yanaco GTR-30XAU. Các điều kiện cụ thể như sau: kích thước màng 50 cm2´ 250 µm, nhiệt độ 25oC, áp suất 1 atm, độ ẩm tương đối 0%, O2 tinh khiết.

2.3.4. Nghiên cứu tính kháng khuẩn 2.3.4.1. Chủng vi sinh vật 2.3.4.1. Chủng vi sinh vật

Ba chủng vi sinh vật tiến hành thử nghiệm được lấy và nuôi cấy từ các chủng chuẩn tại phòng Vi khuẩn đường ruột - Viện Vệ sinh dịch tễ TW.

+ Escherichia coli C126-98.

+ Staphylococcus aureus ATCC29213. + Pseudomonas aeruginosa ATCC27853.

2.3.4.2. Môi trường

a. Môi trường pepton (g/l): pepton (20); NaCl (5). pH = 7,2 ± 0,2. Vô trùng môi trường ở 121°C trong 15 phút.

b. Môi trường thạch thường (g/l): cao thịt (4); pepton bột (10); NaCl (5); thạch(20). pH = 7,4 ± 0,2.Vô trùng môi trường ở 121°C trong 15 phút.

c. Môi trường thạch dinh dưỡng - Brain Heart Agar, Merck: pH = 7,4 ± 0,2 . Vô trùng môi trường ở 121°C trong 15 phút.

2.3.4.3. Phương pháp nuôi cấy

Các chủng vi sinh được cấy trên môi trường lỏng hoặc đặc đã kể trên, ở nhiệt độ 37 °C trong thời gian 24 giờ.

2.3.4.4. Phương pháp đếm vi sinh vật tổng số trên môi trường

thạch

Pha loãng mẫu huyền phù vi sinh vật trong dung dịch pepton sao cho nồng độ vi khuẩn trong mẫu khoảng 101 - 103CFU/ml. Từ mẫu đã pha loãng, rút ra 100 ml cấy lên 3 đĩa thạch. Đặt đĩa vào tủ ấm ở nhiệt độ 37°C, thời gian 24 giờ.

Sau 24 giờ, tiến hành đếm số khuẩn lạc trên đĩa. Lựa chọn hộp có số khuẩn lạc nằm trong khoảng 10 ¸ 300.

Nồng độ vi khuẩn trong mẫu cần xác định ban đầu (X) sẽ là: X = (số khuẩn lạc đếm được/1 hộp) x (10n + 1)

Với n: là hệ số pha lỗng.

2.3.4.5. Phương pháp đánh giá tính kháng khuẩn của dung dịch

keo nano bạc

Vi sinh vật được cấy từ ống thạch nghiêng sang môi trường pepton 2%, nuôi ở 37°C trong 24 giờ. Dịch thu được được tiến hành pha loãng để thu được nồng độ vi khuẩn trong ống là 106, thêm nano bạc vào mỗi ống với các nồng độ thay đổi (0 ¸ 25 ppm). Song song làm thí nghiệm kiểm chứng đối với mẫu khơng bổ sung dung dịch nano bạc.

Để thời gian nano bạc tác dụng khác nhau (30 phút; 60 phút), ở 37°C. Sau thời gian tác dụng, mỗi mẫu được pha loãng 1000 lần. Từ mỗi dịch pha loãng, dùng pipet hút ra 100 ml để cấy lên trên đĩa thạch. Dùng que trang, trang đều vi khuẩn lên bề mặt thạch. Để vào trong tủ ấm, giữ ở 37°C trong 24 giờ. Sau đó, tiến hành đếm khuẩn lạc.

Nồng độ vi khuẩn trong mẫu cần xác định ban đầu (X) sẽ là: X = (số khuẩn lạc đếm được) x (10n + 1)

Hiệu quả kháng khuẩn được đánh giá bằng tỉ lệ % số khuẩn lạc trên các mẫu thí nghiệm so với mẫu chứng.

2.3.4.6. Đánh giá tính kháng khuẩn của vật liệu tổ hợp PLA/nano

bạc

Chuẩn bị canh trường vi khuẩn thí nghiệm có nồng độ 108 CFU/ml. Từ dịch thu được, dùng pipet hút ra 1 ml và tráng đều lên trên đĩa thạch. Ép miếng vật liệu tổ hợp PLA/nano bạc với các nồng độ thay đổi lên trên đĩa, sao cho bề mặt gạch áp sát mặt thạch. Lấy gạch ra, đưa vào hộp lồng và đặt ngửa lên. Giữ cho môi trường trong hộp được ẩm bằng giấy lọc vô trùng và nước cất vô trùng. Để thời gian tác dụng T = 24 giờ, ở 37°C. Song song tiến hành mẫu kiểm chứng với miếng vật liệu PLA không chứa nano bạc.

Đánh giá hiệu quả kháng khuẩn sau thời gian ủ cần thiết: Lấy miếng vật liệu tổ hợp PLA/nano bạc ra, rửa vi khuẩn trong môi trường pepton 20%. Pha loãng dịch rửa 100 lần. Từ dịch pha loãng, rút ra 50 ml trang đều lên trên đĩa thạch. Để vào trong tủ ấm, giữ ở 37°C trong 24 giờ. Tiến hành đếm khuẩn lạc.

Đánh giá kết quả:

So sánh số khuẩn lạc đếm được trên các mẫu thí nghiệm tại thời điểm 0 giờ, 24 giờ với mẫu chứng, tính phần trăm diệt khuẩn đối với từng nồng độ nano bạc khác nhau. Khả năng kháng khuẩn được đánh giá bằng % diệt khuẩn của vật liệu.

2.3.4.7. Phương pháp đánh giá độ bền tính kháng khuẩn của vật

liệu tổ hợp PLA/nano bạc

Các miếng vật liệu tổ hợp PLA/nano bạc được để ở nhiệt độ phòng và cho tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng. Sau thời gian 3 tháng, khảo sát lại khả năng kháng khuẩn của các miếng này đối với các chủng vi sinh vật gây bệnh khác nhau. So sánh hiệu suất diệt khuẩn với các miếng có thời gian lưu giữ 1 ngày.

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tổng hợp và ứng dụng polylactic acid (Trang 76 - 80)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(130 trang)