1.1 .TỤ CẦU KHUẨN
2.2. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
2.2.1. Hóa chất và sinh phẩm
- Hóa chất: Các hóa chất tinh khiết đƣợc sử dụng trong nghiên cứu có nguồn gốc từ các hãng Sigma, Merk, vv ... bao gồm:
Dung dịch tách chiết DNA:TE (Tris-EDTA), Dung dịch CaCl2 0,1M, ampicillin, agarose, acrylamide, bis-acrylamide, TEMED (Sigma), ethidium bromide10% SDS (Invitrogen) và 10% APS (Sigma), blue Coomassie, dung dịch rửa gel SDS (40% methanol, 10% acetic acid), skim milk (Sigma), Tween 20 (Sigma), TMB (Sigma), Polyethylene glycol (PEG) 0,05%, Tris-HCl (pH = 8.2) (Sigma) huyết thanh bào thai bê (BSA), H2SO4 0,5N, NaCl 0,85%,...và các hóa chất, dung mơi khác đều đạt tiêu chuẩn thí nghiệm.
- Các sinh phẩm: Kit tách chiết DNA từ gel agarose GeneJET (Thermo
Scientific); các enzym giới hạn BamHI và HindIII (Thermo Scientific); T4 DNA ligase (New England Biolabs); Kháng thể đa dòng IgG thỏ kháng SEC ab15920 (Abcam); Cộng hợp kháng thể IgG dê kháng kháng thể thỏ gắn HRP ab 97051(Abcam); Kit His Mag SepharoTMNi (GE Healthcare); Tá dƣợc: FCA (Freund’s Complete Adjuvant) và FIA (Freund’s Incomplete Adjuvant) (Sigma); Thang chuẩn điện di protein (Thermo
Scientific); Thang chuẩn điện di DNA 1 Kb Plus (Biogen) ); cột sắc ký “HiTrapTM IgY Purification HP, 5ml” (GE Healthcare).
- Mồi nhân gen: Cặp mồi sử dụng để tạo các điểm cắt của hai enzym giới hạn
là BamHI - F và HindIII - R (chữ đƣợc gạch chân) ở hai đầu đoạn gen mã hố cho
protein SEC1 có trình tự:
Mồi xuôi SEC-F (5'-TTTGGATCCGAGAGCCAACCAGACCCT-3')
và mồi ngƣợc SEC-R (5'- TATAAGCTTTTATCCATTCTTTGTTGTAAGGTGGAC- 3').
- Các dụng cụ, vật tư tiêu hao: Dãy giếng ELISA (Corning); Màng nitrocellulose AE99 (Whatman); Tấm lót plastic vinyl Mylar AD back 79373 (Whatman); Giấy thấm (Whatman); hạt Carbon Black Nano – Strings 0210 (Maiia Diagnostics); Giấy lọc (Whatman) ; ống Falcon (Corning); Màng lọc (Merk), ...
2.2.2. Máy, thiết bị
Các máy, thiết bị đều đang trong thời gian đƣợc kiểm định chuẩn, bao gồm: - Máy chu kỳ nhiệt 96 mẫu (eppendorf, Đức);
- Máy soi chụp ảnh gel (BioRad, Mỹ);
- Bộ điện di DNA Horrizontal mini (CBS Scientific, Mỹ);
- Máy đồng hóa bằng siêu âm Sonics Vibra cell (VCX130, MIDSCI); - Bộ điện di protein (Bio-rad, Mỹ);
- Máy cô đặc mẫu (Thermo Fisher, Mỹ);
- Bộ chuyển protein từ gel sang màng (Mini Trans-Blot Cell, Bio Rad); - Máy quang phổ NanoDrop 2000 (Thermo Fisher, Mỹ);
- Máy in phun Linomat V (CAMAG, Thụy Sĩ); - Máy cắt Cutter 4000 (BioDot, Anh);
- Nồi khử trùng (Harayama, Nhật Bản); - Cân phân tích CPA 324S (Satorius, Đức); - Tủ cấy vô trùng Class II Type A2 (ESCO); - Máy lắc đảo ngƣợc Mini laboroller (Labnet); - Máy lắc ổn nhiệt DTU-2C (Taitec, Nhật Bản); -Máy lắc ổn nhiệt (eppendorf , Mỹ);
- Máy li tâm lạnh Eppendorf Legend X1R (Thermo Fisher, Mỹ); - Máy ly tâm (Eppendorf, CHLB Đức);
- Tủ lạnh (0-4oC) (Toshiba, Nhật);
- Tủ lạnh Biomedical Freezer (Thermo Fisher, Mỹ);
- Máy vortex (Rotolab, OSI); Máy đo pH (HI 8424, HANNA Instruments); - Micropipette các loại Gilson (Pháp) và Biohit (Phần Lan).