Phƣơng pháp
Nồng độ độc tố SEE (ng/ml)
3000 900 300 100 30 9 3 0 0
Que thử + + + + + - - - -
{tc "III.6.2.1. Xác đ?nh đ? nh?y phát hi?n SEA trong s?a" \f C \l 4}
Hình 3.28. Giới hạn phát hiện của que thử với độc tố SEE trên sữa
1; 2; 3; 4; 5; 6; 7: mẫu chứa 3000; 900; 300; 90; 30; 9; 3 ng/ml, 8: mẫu âm tính sữa khơng chứa SEE và 9: mẫu âm tính đệm không chứa SEE.
Tƣơng tự nhƣ với SEC1, các kết quả phân tích trên mẫu sữa gây nhiễm độc tố SEE thực nghiệm ở Bảng 3.11 và Hình 3.28 cho thấy que thử có thể phát hiện đƣợc
độc tố SEE ở các nồng độ pha lỗng 9ng/ml ÷ 3000 ng/ml, giới hạn phát hiện của que thử là 9 ng/ml (que thử số 6).
Nhƣ vậy, khi phân tích que thử với các mẫu sữa đƣợc gây nhiễm các độc tố ruột SEA, SEB, SEC1, SED và SEE, giới hạn phát hiện của que thử trên sữa nhƣ sau: Với các độc tố SEA, SEB và SED giới hạn phát hiện của que thử khoảng 30 ng/ml; với SEC1 và SEE giới hạn phát hiện của que thử là 9 ng/ml, trong điều kiện phịng thí nghiệm.
3.4.2. Sử dụng que thử để phát hiện một số độc tố ruột của tụ cầu (SEA, SEB, SEC1, SED và SEE) trên thịt đƣợc gây nhiễm thực nghiệm SED và SEE) trên thịt đƣợc gây nhiễm thực nghiệm
3.4.2.1. Xác định độ pha loãng thịt để thử nghiệm
Để có thể phát hiện các độc tố ruột tụ cầu trong mẫu thịt cần phải xây dựng đƣợc quy trình chuẩn bị mẫu thích hợp. Nếu tỷ lệ mẫu/đệm chiết là lớn thì khả năng tách chiết độc tố sẽ giảm và các hợp chất trong thực phẩm có thể gây ảnh hƣởng đến tốc độ dòng chảy, phản ứng kháng nguyên – kháng thể. Ngƣợc lại, tỷ lệ mẫu/đệm chiết nhỏ thì độ nhạy của que thử giảm, do độc tố bị pha loãng. Để đánh giá ảnh hƣởng của tỷ lệ mẫu/thể tích đệm chiết khi sử dụng đệm borat chiết các độc tố SEA, SEB, SEC1, SED và SEE, tiến hành nhiễm chủ động các độc tố trên vào mẫu thịt xay đã đƣợc xác định là âm tính với các độc tố này và tách chiết các mẫu thịt xay với tỷ lệ 1/2; 1/4; 1/6 và 1/8. Các kết quả phân tích (Hình 3.29) cho thấy tín hiê ̣u va ̣ch kiểm chƣ́ ng và vạch thử nghiệm có xuất hiê ̣n trong c ả bốn tỷ lệ mẫu/ đệm chiết, trong đó tỷ lê ̣ mẫu /đệm chiết 1/2 (que thử số 1 và que thử số 2) là tỷ lệ pha loãng mẫu thịt thấp nhất, mẫu thịt pha loãng 3 lần. Do vậy, trong các thí nghiệm tiếp theo, chúng tơi đã sử dụng tỷ lê ̣ mẫu/đệm chiết là 1/2 để chuẩn bị mẫu thịt tiến hành các thử nghiệm phân tích bằng que thử.
Hình 3.29. Lựa chọn độ pha lỗng thịt cho que thử
1, 3, 5, 7: Các mấu thịt xay âm tính pha lỗng với tỷ lệ tương ứng 1/2; 1/4; 1/6; 1/8; 2, 4,6,8: Các mẫu thịt xay nhiễm chủ động 30 ng, 60ng, 90ng và 120ng SEC1
tương ứng với các tỷ lệ pha loãng mẫu 1/2;1/4; 1/6; 1/8.
3.4.2.2. Kết quả phát hiện một số độc tố ruột (SEA, SEB, SEC1, SED và SEE) trên thịt được gây nhiễm thực nghiệm trên thịt được gây nhiễm thực nghiệm
Xác định giới hạn phát hiện SEA trên thịt