CHƯƠNG II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.5.2 Nghiên cứu các điều kiện nuôi cấy xốp thích hợp cho khả năng
phytase ở chủng nghiên cứu
Chủng vi khuẩn được nuôi lắc khởi động trong môi trường dịch thể NA ở 40oC, sau 24 h được cấy vào các mơi trường xốp trong các thí nghiệm sau:
a/ Lựa chọn cơ chất
Chủng vi sinh vật được nuôi cấy trên các cơ chất xốp khác nhau (theo 2.1.2.4), ủ 3,5 ngày ở 40oC, sau đó được chiết bằng nước cất theo tỷ lệ 1 cơ chất: 2 nước cất, lắc 200 vòng/phút/h. Chiết dịch enzyme bằng ly tâm 8000 vòng/phút /15 phút, thu dịch trong và xác định hoạt tính enzyme phytase. So sánh hoạt tính enzyme thu được trên mỗi loại cơ chất để lựa chọn được cơ chất thích hợp nhất.
b/ Lựa chọn thời gian nuôi cấy
Chủng vi khuẩn được ni cấy xốp trên cơ chất thích hợp, ở 40oC. Lần lượt lấy mẫu, chiết dịch enzyme, xác định hoạt tính phytase sau 12 h từ ngày thứ 1-5 ngày. Đánh giá hoạt tính phytase đo được và sinh khối để lựa chọn thời gian thích hợp nhất.
c/ Lựa chọn độ ẩm
Chủng vi khuẩn được ni trên cơ chất xốp thích hợp ở các độ ẩm lần lượt là 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80%. Ủ trong 3,5 ngày ở 40oC, chiết dịch enzyme và xác định hoạt tính phytase. Đánh giá hoạt tính phytase đo được để lựa chọn độ ẩm thích hợp nhất.
c/ Lựa chọn tỷ lệ cấy giống
Chủng vi khuẩn được nuôi trên cơ chất xốp thích hợp với các tỷ lệ cấy giống lần lượt là 1, 5, 10, 15, 20%. Ủ trong 3,5 ngày ở 40oC, chiết dịch enzyme và xác định hoạt tính phytase. So sánh các kết quả hoạt tính phytase để lựa chọn tỷ lệ cấy giống thích hợp nhất.
d/ Lựa chọn nguồn cacbon bổ sung
Chủng vi khuẩn được nuôi trên cơ chất xốp thích hợp có bổ sung 1% nguồn cacbon trong thành phần dung dịch làm ẩm lần lượt là: đường đơn (glucose, galactose), đường đôi (sucrose, lactose), đường 5 xylose, rượu (manitol, glycerol), polysaccarit (CMC, tinh bột tan). Ủ trong 3,5 ngày ở 40oC, chiết dịch enzyme và
xác định hoạt tính phytase. So sánh các kết quả hoạt tính phytase để lựa chọn nguồn cacbn thích hợp nhất.
e/ Lựa chọn nguồn nitơ bổ sung
Một thành phần thiết yếu trong môi trường dinh dưỡng của tất cả các vi sinh vật là nguồn nitơ. Chủng vi khuẩn được ni trên cơ chất xốp thích hợp có bổ sung 0,5% nguồn nitơ trong thành phần dung dịch làm ẩm lần lượt là: nguồn nitơ hữu cơ (cao men, cao thịt, peptone), nguồn nitơ vô cơ (urê, NaNO2, NaNO3, NH4NO3, (NH4)2SO4). Ủ trong 3,5 ngày ở 40oC, chiết dịch enzyme và xác định hoạt tính phytase. Đánh giá hoạt tính phytase đo được để lựa chọn nguồn nitơ thích hợp nhất. f/ Lựa chọn các ion kim loại bổ sung
Chủng vi khuẩn được ni trên cơ chất xốp thích hợp có bổ sung các ion kim loại khác nhau trong thành phần dung dịch làm ẩm lần lượt là: Ca2+, Cu2+, Zn2+, Fe2+, Mg2+, Mn2+, Na+, Ba2+ (0,2%). Ủ trong 3,5 ngày ở 40oC, chiết dịch enzyme và xác định hoạt tính phytase, sau đó so sánh các kết quả đo được để chọn được ion kim loại có tác động tích cực nhất.
g/ Ảnh hưởng của Ca2+ ở các nồng độ khác nhau
Chủng vi khuẩn được nuôi trên cơ chất xốp thích hợp có bổ sung Ca2+ trong thành phần dung dịch làm ẩm lần lượt là: 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8%. Ủ trong 3,5 ngày ở 40oC, chiết dịch enzyme và xác định hoạt tính phytase.