G= (100−𝑊) 𝑚
2.2.2.12 Xác định hàm lượng đường khử bằng phương pháp DNS (Miller, 1972)
1972)
❖ Hóa chất
- DNS:1g, 0,2 g phenol, 0,05 g Na2SO3 pha trong 100 mL NaOH 1%, ở 4oC - Phenol: 0,2 g
- Sodium sulfite anhydrous (Na2SO3): 0,05 g - Sodium hydroxide (NaOH) 1%
- Dung dịch glucose
- Potassium sodium tartrate (C4H4O6KNa) 40% - Ethanol 80o
- Dung dịch glucose chuẩn 1000ppm: Hòa tan 0,1 g glucose trong 100 mL nước cất.
❖ Cách tiến hành
Cân 0,1 g mẫu, trích ly đường bằng ethanol 80o nóng 2 lần (mỗi lần 5 mL). Đem đun cách thủy ở 80oC. Thêm 10 mL nước để hòa tan đường.
Lập đường chuẩn với các dung dịch glucose chuẩn 300ppm và tiến hành tạo phức màu theo mẫu trong bảng:
Đường chuẩn xác định đường khử được xây dựng như sau:
Ống nghiệm 0 1 2 3 4 M
Chuẩn glucose 300ppm 0 0,2 0,4 0,6 0,8
Dịch xác định (mL) 1
Nước cất (mL) 3 2,8 2,6 2,4 2,2 2
DD DNS (mL) 3 3 3 3 3 3
Đun sôi trong 5 phút, sau đó làm lạnh
Potassium sodium tartrate 1 1 1 1 1 1
Hàm lượng glucose chuẩn (mg) 0 0,2 0,4 0,6 0,8
Xây dựng đồ thị đường chuẩn trong đó, trục hoành là nồng độ chất chuẩn, trục tung là độ hấp thu. Lập phương trình đường chuẩn y=ax.
❖ Tính kết quả
Hàm lượng đường khử (%) = C x 𝑉đ𝑚
𝑉𝑥đ x 100
𝐺 x K Trong đó:
K: Hệ số pha loãng mẫu
100: Hệ số chuyển đổi sang đơn vị phần trăm
C: lượng glucose được suy ra từ đồ thị đường chuẩn (mg) Vđm: thể tích định mức dịch mẫu (mL)
Vxđ: thể tích dịch mẫu hút đem đi phản ứng với thuốc thử (mL)
G = (100−𝑊) x 𝑚
100 : trọng lượng theo chất khô của mẫu đem đi phân tích (mg) m: khối lượng mẫu đem đi phân tích (mg)
43