G= (100−𝑊) 𝑚
2.3.14 Thí nghiệm 16-17: Khảo sát ảnh hưởng của ethanol và acetone đến khả năng kết tủa enzyme cellulase
năng kết tủa enzyme cellulase
Mục đích: Tìm ra loại dung môi hữu cơ và nồng độ dung môi thích hợp nhằm đạt
hiệu quả kết tủa tốt nhất mà không làm biến tính enzyme.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm tiến hành với 1 nhân tố.
Nhân tố N: Tỷ lệ ethanol/enzyme thô (v/v) N1: 1,5/1 N3: 2,5/1 N5: 3,5/1 N2: 2/1 N4: 3/1 N6:4/1 Nhân tố O: Tỷ lệ acetone/enzyme thô (v/v)
O1: 1/1 O3: 2/1
Xác định hoạt tính enzyme, protein
59
O2: 1,5/1 O4: 2,5/1 Số nghiệm thức: 10
Số mẫu thí nghiệm: 10 x 3 lần lặp lại = 30 mẫu.
Cách tiến hành: Dung dịch enzyme thô được làm lạnh đến 40C trước khi thực hiện quá trình kết tủa.
Tiến hành làm lạnh dung môi hữu cơ trước đến nhiệt độ đạt 4 ± 0,5°C, cho từ từ vào các ống nghiệm chứa enzyme thô theo các tỷ lệ như đã bố trí, lắc nhẹ và để ổn định 2 giờ ở 4°C. Sau khi kết tủa, hỗn hợp được ly tâm ở 4°C, 10000 vòng/phút trong 15 phút thu được phần kết tủa. Phần kết tủa được hòa tan bằng dung dịch đệm citrate (pH 4,8). Xác định hoạt tính cellulase, đo hàm lượng protein và tính toán hiệu quả tinh sạch enzyme.
Chỉ tiêu theo dõi: Hoạt tính enzyme cellulase, hàm lượng protein
Kết quả thu nhận: Chọn được dung môi hữu cơ và nồng độ thích hợp mà tại đó
hoạt tính cellulase là cao nhất hoặc độ tinh sạch cao nhất. Sơ đồ bố trí thí nghiệm:
Dung môi hữu cơ
Làm lạnh 40C ± 0,50C Dịch enzyme thô (40C ± 0,50C) Kết tủa Acetone (v/v) Ethanol (v/v) O4 O3 O2 O1 N6 N5 N4 N3 N2 N1 Lắc nhẹ, ổn định 2 giờ ở 40C Ly tâm 10000 vòng trong 20 phút, 40C
Thu lấy kết tủa
60
Hình 2.18 Sơ đồ kết tủa enzyme cellulase bằng dung môi hữu cơ