của nước sinh hoạt
HOẠT HÓA GIỐNG
NHÂN GIỐNG CẤP1
NHÂN GIỐNG CẤP 2
LÊN MEN XÁC ĐỊNH MẬT ĐỘ VI KHUẨN
THU SINH KHỐI
ỔN ĐỊNH SINH KHỐI VI KHUẨN BỘ SẢN PHẨM TẠO KIT GIỐNG DÙNG CHO SẢN XUẤT
Các hạng mục chính của quy trình bao gồm:
Giống dùng cho sản xuất: giống dùng cho sản xuất được phân lập từ nước
đầm tơm, Đình Vũ, Hải Phịng. Giống được lưu trữ tạm thời bằng kỹ thuật cấy chuyển từ môi trường thạch qua các khoảng thời gian.
Hoạt hóa giống: Giống dùng cho sản xuất được hoạt hóa trong ống nghiệm
với thế tích nhỏ. Bước này sử dụng chính mơi trường của chúng Photobacterium để tạo dinh dưỡng thúc đẩy quá trình sinh trưởng, chống mất hoạt tính.
Nhân giống cấp 1: Bước này giống hoạt hóa tiếp tục được cấy sang môi trường (Photobacterium) nhằm tăng sinh khối cho nghiên cúu trong phịng thí nghiệm.
Nhân giống cấp 2: Trong quy mô sản xuất cần nhân giống cấp 2 để nhân
một lượng giống lớn đáp ứng cho khâu giống trong sản xuất. Giống được nuôi cấy ở điều kiện tối ưu đã nghiên cứu trong tất cả các bước:
- Môi trường Photobacterium - pH = 6-7
- Nhiệt độ ni 20-26ºC. - Tốc độ lắc 200 vịng/phút
Lên men: Qúa trình ni cấy Vibrio fischeri từ giống để tạo sinh khối lớn
phục vụ cho bước tiếp theo.
Xác định mật độ vi khuẩn, thu sinh khối: nồng độ vi khuẩn Mục tiêu trong bộ KIT cần đạt 5.109 CFU/g, vì vậy bước này cần xác định mật độ vi khuẩn
bằng cách gạt đĩa và đếm trên mơi trường thạch. Từ đó, xác định thể tích vi khuẩn cần sử dụng để ly tâm thu sinh khối đạt mục tiêu trên.
Tạo KIT: Đây là bước quan trọng của quy trình.
- Tạo KIT: Vi khuẩn sau khi được thu sinh khối được rửa với NaCl đệm 3 lần, sau đó được bổ sung chất bảo quản và bọc vi cầu alginate, mật độ tế bào tối ưu để bọc vi cầu trong khoảng OD600 0,75-0,9. Kết quả nghiên cứu mục 4.3.1 cho phương pháp bảo quản lỏng bằng môi trường sữa gầy 10%. Bộ KIT được bảo quản ở nhiệt độ lạnh 5ºC để phù hợp cho vận chuyển sử sụng cho hoạt động dã ngoại, thực địa vùng sâu, vùng xa.
Bốn thành phần phụ trợ được chế tạo theo nghiên cứu bước 4.3.2.
Các thành phần phụ trợ khác bao gồm in ấn bao bì, nhãn mác, hịm, hộp, các ống đựng vi khuẩn được mua và đặt mua tại cơ sở tin cậy,
Bộ sản phẩm: Bộ sản phẩm KIT phát hiện nhanh độc tính cấp nước sinh
hoạt gồm 5 thành phần và máy đo Deltatox II:
Ống vi khuẩn (KIT): chứa vi khuẩn đã được xử xý, bảo quản bằng phương pháp tối ưu đã được nghiên cứu.
Các thành phần phụ trợ bao gồm: Dung dịch pha lỗng, dung dịch hoạt hóa, dung dịch đối chứng, dung dịch xử lý mẫu (đã được nghiên cứu trong mục 4.3.2).