Mẫu thực LOD (ppb)
Nước tiểu, mắt, tóc 0,185
Gan 0,296
Thịt 0,092
Thức ăn gia súc, bột sữa 3,700
Nước tiểu (phương pháp 2) 0,037
Gan (Phương pháp 2) 0,074
Một phần mẫu thức ăn chăn nuôi đã thêm chuẩn được phân tích sử dụng bộ kit ELISA CLENBUTEROL (Hãng sản xuất: Tecna – Ý, Xuất xứ: EU), đây là một bộ thuốc thử cho xét nghiệm miễn dịch phân tích định lượng dư lượng CLB trong mắt, tóc, gan, thịt, sữa, thức ăn chăn nuôi ... được sử dụng trong phòng kiểm nghiệm (Bảng 3.8).
Cùng mẫu thức ăn chăn nuôi ở trên sau khi tiến hành phân tích theo hướng dẫn sử dụng, kết quả xác định CLB thu được như bảng 3.9.
93
Bảng 3.9. Độ chính xác của mẫu thức ăn ở các nồng độ khác nhau theo phương pháp ELISA
Mẫu Nồng độ CLB thêm vào (ng/mL) Nồng độ CLB xác định đƣợc (ng/mL) Độ chính xác (%) S1 1 0,366 36,6 S2 10 6,510 65,1 S3 103 712,000 71,2
Từ bảng 3.6 và bảng 3.8, rút ra được bảng so sánh kết quả theo hai phương pháp khác nhau thu được kết quả như bảng 3.10.
Bảng 3.10. So sánh độ chính xác của phương pháp sensor và phương pháp ELISA khi xác định dư lượng CLB trong mẫu thức ăn chăn nuôi
Mẫu Nồng độ CLB thêm vào (ng/mL) Độ chính xác của phƣơng pháp sensor (%) Độ chính xác của phƣơng pháp ELISA (%) S1 1 88,17 36,6 S2 10 92,30 65,1 S3 103 86,00 71,2
Độ chính xác của phương pháp sensor xác định dư lượng CLB trong thức ăn chăn nuôi dựa vào hiệu ứng FRET quang cao hơn rất nhiều so với phương pháp ELISA, cách thức thực hiện đơn giản và thời gian thực hiện nhanh hơn.
3.6.2 So sánh khả năng xác định CLB bằng phương pháp huỳnh quang sử dụng sensor được chế tạo từ Qds sử dụng hiệu ứng FRET với phương pháp sử dụng sensor được chế tạo từ Qds sử dụng hiệu ứng FRET với phương pháp HPLC/MS
Tại phòng thí nghiệm của Viện Khoa học và Công nghệ - Bộ Công an. Mẫu thức ăn chăn nuôi có chứa CLB thêm chuẩn được phân tích trên hệ thống
HPLC/MS-Varian. Mẫu được chiết tách bằng dung dịch đệm K2HPO4, làm
sạch mẫu qua cột pha rắn SCX. Chế độ phân tích với cột C18 kích thước 2,1x100 mm, kích thước hạt nhồi 1,7 µm, cột được hoạt hoát bằng MeOH, thành
phần pha động MeOH/H2O, tốc độ pha động 300 µl/phút. Phổ sắc ký đồ của
94
Hình 3.39. Phổ sắc ký của CLB
Tiến hành phân tích phổ phân mảnh lần thứ nhất của CLB nhằm xác định ion sơ cấp, phổ khối của CLB khi tiến hành phân mảnh lần thứ nhất như hình 3.40.
95
Từ phổ khối của CLB sau khi tiến hành phân mảnh lần thứ nhất có thể dễ dàng nhận thấy, ion 277 có tỉ lệ là lớn nhất, do đó ion này được xác định là ion sơ cấp chính. Để quá trình định lượng CLB được chính xác hơn với độ chọn lọc cao hơn, ion này sẽ được sử dụng để tiếp tục phân mảnh xác định ion thứ cấp với các điều kiện khối phổ thích hợp, Phổ khối khi tiến hành phân mảnh ion sơ cấp như hình 3.41.
Hình 3.41. Phổ khối chuẩn của CLB khi tiến hành phân mảnh ion sơ cấp
Từ phổ khối chuẩn của CLB có thể dễ dàng nhận thấy sau khi tiến hành phân mảnh ion sơ cấp (ion 276) thu được ion thứ cấp có tỉ lệ m/z là 86 có tỉ lệ lớn nhất, ion này được xác định là ion chính dùng để định lượng CLB. Từ dung dịch chuẩn CLB, tiến hành chuẩn bị các điểm chuẩn với các nồng độ như bảng 3.11.
Bảng 3.11. Nồng độ chuẩn của CLB khi tiến hành phân tích trên hệ thống HPLC/MS – Varian.
Mẫu 1 2 3 4 5 6
CLB (g/ml) 10-9 5x10-9 10-8 10-7 5x10-6 10-6
Tiến hành tách các mẫu chuẩn trên cột C18 với thành phần và tốc độ pha động như trên. Cường độ tín hiệu được xác định qua cường độ của ion thứ cấp. phổ khối khi tiến hành phân tích CLB trên hệ thống HPLC/MS/MS như hình 3.42.
96
Hình 3.42. Phổ khối của các mẫu chuẩn
Dựa trên phần mềm tính toán của hệ thống phân tích khối phổ Varian ta thu được kết quả phân tích và độ chính xác của phương pháp phân tích CLB có trong mẫu thực thu được như bảng 3.12.