CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN
1.3. Hiệu ứng truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang FRET
1.3.2.2. Phát hiện hiệu ứng FRET
Việc phát hiện và định lượng hiệu ứng FRET có thể được thực hiện trong một số cách khác nhau. Đơn giản chỉ cần hiện tượng này có thể được quan sát bởi một mẫu vật có chứa cả các chất cho và các phân tử chất nhận với ánh sáng phát ra ở các bước sóng trung tâm gần với phát xạ. Bởi vì FRET có thể dẫn đến giảm cường
44
độ huỳnh quang của các phân tử chất cho cũng như tăng cường độ huỳnh quang của chất nhận, nên khi xác định tỷ lệ số liệu của hai tín hiệu có thể phát hiện được hiệu ứng FRET có xảy ra hay không.
Ưu điểm của phương pháp này là một thước đo của sự tương tác có thể được thực hiện là độc lập với nồng độ tuyệt đối của cảm biến. Bởi vì không phải tất cả các gốc chất nhận đều phát huỳnh quang, nên chúng có thể được sử dụng như một phương tiện để dập tắt huỳnh quang. Trong trường hợp này, những tương tác mà kết quả trong một phân tử các chất huỳnh quang cho đến gần phân tử như vậy sẽ dẫn đến một sự mất mát tín hiệu.
Hình 1.20. Quang phổ huỳnh quang của chất cho, chất nhận và dung dịch hỗn hợp của chất cho và chất nhận [101]
Trong hình 1.20, huỳnh quang của chất nhận tăng gần sáu lần khi có sự hiện diện của chất cho, cường độ phát xạ của chất cho giảm còn 1/3 so với cường độ phát xạ ban đầu. Sự thay đổi cường độ huỳnh quang là bằng chứng hình ảnh rõ ràng của FRET. Các quang phổ huỳnh quang đã được ghi nhận là sự phát huỳnh quang của chất cho và nhận. Đây là hiệu ứng FRET sử dụng các chất cho octadecyl-2[3-
octadecyl-2(3H)-benzothizolidene) metyl] benzothiazolium perchlorate và
chất nhận Octadecyl rhodamine B [101].