1.3.3.1. Phương phỏp di truyền tế bào học (xột nghiệm NST)
Nuụi cấy tế bào dịch ối
Phõn tớch NST của tế bào nuụi cấy từ dịch ối được xem như là phương phỏp thuận tiện nhất, tin cậy nhất cho chẩn đoỏn trước sinh.
Dịch ối là một tế bào khụng đồng nhất, phụ thuộc vào giai đoạn phỏt triển của thai, gồm cỏc tế bào màng ối, tế bào da, tế bào đường tiết niệu, đường hụ hấp, khoảng 0,5% là tế bào mỏu của mẹ và thậm chớ cú cả tế bào mỏu của thai. Do đú, phõn tớch NST của tế bào nuụi cấy từ dịch ối được xem như là phương phỏp thuận tiện nhất, tin cậy cho chẩn đoỏn trước sinh.
Lượng nước ối cần để xột nghiệm NST được chia đều vào 2 lọ nuụi cấy. Do cỏc tế bào nước ối là cỏc tế bào bong nờn nuụi cấy cần một chế độ đặc biệt như mụi trường Chang, Amnio Max để tạo cỏc tế bào sợi bỏm dớnh vào mặt bỡnh nuụi cấy. Nuụi cấy theo phương phỏp hở trong tủ ấm 370C với 5% CO2 và 95% khụng khớ cựng nguồn ẩm. thời gian trung bỡnh để cú kết quả phõn tớch NST là 10 đến 20 ngày [38].
Nuụi cấy tế bào mụ (tế bào gai rau)
Cú hai phương phỏp sử dụng nuụi cấy tế bào mụ.
Dầm cơ học những mảnh mụ thành những mảnh mụ nhỏ để nuụi cấy. Dựng enzym (collagenase, trysin) để tỏch riờng tế bào mụ thai.
Bổ sung mụi trường nuụi cấy để cỏc tế bào mụ phỏt triển. Nuụi cấy theo phương phỏp cấy hở.
Để xỏc định chớnh xỏc vị trớ của NST trong bộ NST người ta ỏp dụng kỹ thuật băng: băng G, băng Q, băng R, băng C, băng T…. Cho đến nay nhuộm băng là quy trỡnh khụng thể thiếu khi đỏnh giỏ NST [38].
1.3.3.2. Phương phỏp di truyền học phõn tử.
Kỹ thuật FISH
FISH là một kỹ thuật tế bào và phõn tử, sử dụng một trỡnh tự ngắn của chuỗi ADN sợi đơn, được gọi là mẫu ADN dũ (cỏc mẫu ADN dũ này được đỏnh dấu bằng cỏc đồng vị phúng xạ hoặc phẩm nhuộm huỳnh quang).
Cỏc mẫu ADN dũ này sẽ được lai với ADN đớch trờn tiờu bản NST ở kỳ giữa, kỳ đầu hoặc gian kỳ. Qua sự lai này ta cú thể phỏt hiện, định vị được vị trớ chuỗi ADN đặc hiệu dưới kớnh hiển vi huỳnh quang. Kỹ thuật này được ứng dụng trong xõy dựng bản đồ gen và xỏc định bất thường NST.
Ưu điểm của kỹ thuật FISH là phỏt hiện nhanh chúng những bất thường NST trong vũng 24 – 48 giờ vỡ sử dụng trực tiếp tế bào ối, tế bào gai rau khụng cần qua nuụi cấy. Hạn chế của FISH là giỏ thành mẫu xột nghiệm cao hơn nhiều so với cỏc mẫu nuụi cấy thụng thường (cấy ối, cấy tua rau….) vỡ vậy khụng phự hợp cho mọi đối tượng xột nghiệm [38], [62].
Phương phỏp nhõn bản ADN in vitro hay phản ứng chuỗi polymerae PCR (polymerase chain reaction)
Trong chẩn đoỏn trước sinh, PCR đựợc dựng để chẩn đoỏn cỏc hội chứng: HC Down, HC Edwards, HC Patau, hội chứng Tuner và một số bệnh khỏc như bệnh xơ nang, teo cơ Duchen, RhD của phụi thai, tỡm ARN của virus… bằng phương phỏp PCR cú gắn huỳnh quang từ những tế bào ối hoặc tế bào rau, tế bào lympho khụng cần qua nuụi cấy.
Như vậy, cú rất nhiều phương phỏp để lấy được tế bào cú nguồn gốc từ thai nhưng phương phỏp được sử dụng nhiều nhất là phương phỏp nuụi cấy tế bào ối do cú nhiều ưu điểm và giỏ thành xột nghiệm dễ được chấp nhận hơn so với cỏc kỹ thuật khỏc [4].