thu peptide cĩ hoạt tính sinh học
Từ kết quả các nghiên cứu trên, bước đầu chúng tơi xây dựng được quy trình cơng nghệ thu peptide cĩ hoạt tính sinh học bằng phương pháp thủy phân giới hạn bã nấm men bia nhờ chế phẩm protease Neutrase :
Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học
Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Bước 1: Tiền xử lý: Nấm men được lấy từ nhà máy, được rửa với nước lạnh, sau đĩ để lắng tự nhiên trong 30 phút, quá trình được lặp lại 3 lần. Tỉ lệ bã nấm men/ nước : 1/2. Mục đích loại bỏ bia và vị đắng, một số tạp chất. Sau khi rửa, ly tâm loại bớt nước.
Bước 2: Thủy phân bã nấm men bia: Trước khi thủy phân, bã nấm men được đun cách thủy (gia nhiệt) 95oC trong 5 phút để diệt nấm men sống. Tiến hành thủy phân với Enzym Neutrase nồng độ 5%, nồng độ cơ chất 25%, pH 6.5, thời gian 16h, tốc độ lắc 150 vịng/phút.
Bước 3: Kết thúc quá trình thủy phân, dịch thủy phân được đun cách thủy 95oC trong 5 phút để bất hoạt enzym. Sau đĩ, dịch peptide được ly tâm 12000 vịng/ phút, thời gian 20 phút, nhiệt độ 4 oC. Loại bỏ bã, thu dịch nổi bên trên.
Bước 4: Dịch sau thủy phân được lọc qua màng siêu lọc 10 KDa, với áp suất vào 8psi, áp suất ra 10 psi, tốc độ bơm 35 ml/phút ở điều kiện nhiệt độ phịng. ở quá trình này, thu nhận dịch peptide cĩ kích thước nhỏ dưới 10 KDa
Bước 5 : Thu peptide cĩ kích thước dưới 10 KDa đã qua màng, Kiểm tra độ tinh sạch bằng phương pháp điện di trên gel Polyacrylamide (SDS-PAGE). Xác định một số hoạt tính sinh học, hoạt tính kìm hãm ACE, hoạt tính ức chế sự phát triển của vi khuẩn và hoạt tính chống oxy hĩa.