monocytogenes
Chủng giống từ tủ bảo quản được nuơi cấy trong mơi trường LB lỏng (2ml LB+ 200 µl dịch khuẩn). Sau 10-12h, Đo mật độ vi khuẩn lần 1, hút 100 µl dịch khuẩn vào 2ml mơi trường cĩ bổ sung dịch thủy phân với các nồng độ khác nhau (10-30-60 µg/ml). Nuơi cấy lắc ở nhiệt độ 37oC, trong 24h. pha lỗng dịch khuẩn nuơi cấy ở các hệ số từ 102- 106 CFU/mL, hút 100 µl trang trên đĩa thạch LB, nuơi cấy trong 24h, quan sát kết quả so với mẫu đối chứng đĩa thạch cĩ cùng nồng độ vi khuẩn và khơng chứa dịch thủy phân.
Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học
Bảng 3.3. Kết quả đếm số lượng khuẩn lạc trên các mơi trường
Vi khuẩn Mơi trường
Số lượng khuẩn lạc (x 10 CFU/ml) Tỷ lệ giảm so với ĐC (%) 0h Sau 24h Salmolena Typhi LB (ĐC) 23,2 8245 LB + 10 µg/ml 22,9 4450 46.03 LB + 20 µg/ml 23,03 2376 71.18 LB + 30 µg/ml 22,87 0.504 99.99 Listeria monocytogenes LB (ĐC) 16,3 9203 LB + 10 µg/ml 16,62 6276 31.80 LB + 20 µg/ml 16,98 3713 59.65 LB + 30 µg/ml 16,42 1232 86.61 Staphylococcus aureus LB (ĐC) 42,21 10400 LB + 10 µg/ml 41,98 7654 26.40 LB + 20 µg/ml 42,02 4278 58.87 LB + 30 µg/ml 42,11 2509 75.88
Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học
Hình 3.10. Hình ảnh khuẩn lạc Salmolena Typhi sau 24h nuơi cấy so với mẫu đối chứng khơng bổ sung dịch peptide
Từ hình ảnh và kết quả bảng 3.3 cho thấy nhìn chung với cả 3 chủng vi khuẩn khi nuơi cấy trên mơi trường cĩ bổ sung peptide đều giảm số lượng khuẩn lạc sau 24h nuơi . Với chủng vi khuẩn Salmolena Typhi, lượng dịch bổ sung 10 µg/ml và 20 µg/ml peptide vào mơi trường nuơi cấy làm giảm số lượng khuẩn lạc từ 46, 03- 71,18 % . Đặc biệt khi bổ sung 30 µg/ml vào mơi trường nuơi cấy, số lượng vi khuẩn giảm mạnh nhất tới 99,99% . Từ đĩ cĩ thể kết luận với 30 µg/ml peptide bổ sung vào mơi trường nuơi cấy ức chế sự phát triển của vi khuẩn Salmolena Typhi.
Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học
Hình 3.11. Ảnh khuẩn lạc Listeria monocytogenes sau 24h nuơi cấy so với mẫu đối chứng khơng bổ sung dịch peptide.
Đối với vi khuẩn Listeria monocytogenes, bổ sung 10 µg/ml; 20 µg/ml; cĩ làm giảm số lượng vi khuẩn mọc sau 24h với tỷ lệ từ 31.80 đến 59.65%, tuy nhiên với 30 µg/ml dịch peptide làm giảm số lượng vi khuẩn mạnh nhất 86.61 % nhưng chưa làm giảm hồn tồn.
Đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus số lượng khuẩn lạc cĩ giảm sau 24h nuơi cấy với từng nồng độ peptide bổ sung 10; 20; 30 µg/ml peptide tương ứng với tỷ lệ 26.40% ; 58.87% ;75.88%. Ở nồng độ 30 µg/ml peptide bổ sung số lượng vi khuẩn nuơi cấy giảm mạnh nhất.
Luận văn thạc sỹ Cơng nghệ sinh học Từ kết quả trên, chúng tơi đưa ra kết luận peptide thấp phân tử thủy phân từ bã nấm men bia cĩ hoạt tính ức chế sự phát triển của 3 chủng vi khuẩn gây hại là
Salmolena Typhi , Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus.