Trước khi thực hiện bước tiếp theo, DNA được tinh sạch từ phản ứng PCR hoặc từ gel agarose bằng bộ kit của hãng Qiagen .
Quy trình tinh sạch DNA từ sản phẩm PCR:
Cộng 5 lần thể tích PBI vào 1 thể tích mẫu PCR và trộn đều
Cho hỗn hợp trên vào cột tinh sạch
Ly tâm cột với tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút, loại bỏ dịch sau ly tâm
Rửa cột bằng 750 µl PE và ly tâm với tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút, loại bỏ dịch sau ly tâm.
Ly tâm tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút để làm khô cột và chuyển cột sang eppendorf 1,5ml mới
Cho 30-50 µl EB hoặc nước vô trùng vào giữa màng trong cột và giữ yên trong 1 phút
Ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút và thu nhận dịch sau ly tâm trong eppendorf
Quy trình tinh sạch DNA từ gel agarose:
Cắt phần gel agarose có chứa đoạn DNA mục tiêu
Cho gel vào eppendorf và cân. Thêm 3 lần thể tích dung dịch QG vào mẫu gel (~300 µl QG cho 100mg gel)
Ủ hỗn hợp ở 50oC trong 10 phút để gel tan hoàn toàn
24
Cho hỗn hợp trên vào cột tinh sạch
Ly tâm cột với tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút, loại bỏ dịch sau ly tâm
Rửa cột bằng 750 µl PE, ly tâm với tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút, loại bỏ dịch sau ly tâm
Ly tâm tốc độ 13000 vòng/phút trong 1 phút để làm khô cột và chuyển cột sang eppendorf 1,5ml mới
Cho 30-50 µl EB hoặc nước vô trùng vào giữa màng trong cột và giữ yên trong 1 phút
Ly tâm 13000 vòng/phút trong 1 phút và thu nhận dịch sau ly tâm trong eppendorf