- Cho 0,5 mL máu tƣơi toàn phần đã chống đông vào ống Eppendof 1,5 mL sau đó cho thêm vào 0,5 mL dung dịch Lysis buffer rồi để trên đá trong 10 phút.
- Ly tâm 8000 vòng/ phút trong 10 phút ở 4oC, bỏ dịch nổi và thu cặn. lặp lại quá trình này 4 lần.
- Cho 0,5 mL dung dịch K vào, ly tâm 8000 vòng/ phút trong 10 phút ở 4 oC, bỏ dịch nổi và thu cặn.
- Cho 0,5 mL Lysis buffer, 12,5 µL SDS 10%, 10 µL Proteinase K, ủ ở 56 oC từ 2-3 h.
- Cho 0,5 mL phenol: chloroform: isoamyl, ly tâm 10000 vòng/phút trong 10 phút ở 4 o
C, hồn hợp đƣợc chia làm 3 phần: Lớp dung dịch phía trên có chứa DNA Lớp ở giữa là cặn tế bào
Lớp dƣới cùng là dịch chiết
Hút lấy phần dịch chứa DNA phía trên cùng và tiến hành lặp lại các bƣớc trên một lần nữa sẽ đảm bảo không còn tạp chất trong mẫu.
- Cho 0,5 mL chloroform: isoamyl, ly tâm mẫu ở 10.000 vòng/phút trong 10 phút ở 4 o
C. Hút lấy phần dịch trên cùng và tiến hành lặp lại một lần nữa. - Tủa DNA bằng 1 mL cồn tuyệt đối, cho thêm 50 µL sodium acetat, để lạnh qua đêm ở -20 o
C.
- Ly tâm 13.000 vòng/phút trong 20 phút ở 4 oC, đổ dịch nổi phía trên, thu tủa.
- Rửa tủa bằng cồn 70 oC. Tủa DNA đƣợc hoà tan bằng 50 mL nƣớc tinh khiết hoặc TE.
Phân tử DNA thu đƣợc sẽ đƣợc kiểm tra độ tinh sạch bằng phuơng pháp đo mật độ quang ở bƣớc sóng 260/280 nm và điện di trên gel agarose 0,8%.