Hiện nay, kỹ thuật MLPA đƣợc sử dụng trong nhiều nghiên cứu về bệnh lý di truyền, nó cho phép phát hiện các tổn thƣơng gen một cách nhanh chóng. Trong kỹ thuật MLPA, mỗi probe chứa hai phân tử oligonucleotid có kích thƣớc khác nhau: phân tử oligonucleotid ngắn, phân tử oligonucleotid dài. Số lƣợng sản phẩm khuếch đại của mỗi probe sẽ tỷ lệ thuận với số bản copy của đoạn DNA đích đặc hiệu với probe đó [107], [108].
Sản phẩm khuếch đại của các probe được phân tách bằng điện di, số lượng sản phẩm khuếch đại của mỗi probe tỷ lệ thuận với số bản sao của đoạn DNA đích
Biến tính
PCR
Sản phẩm khuếch đại của các probe được phân tách bằng điện di, số lượng sản phẩm khuếch đại của mỗi probe tỷ lệ thuận với số bản sao của đoạn DNA đích
Biến tính
PCR
Hình 1.8. Các giai đoạn của kỹ thuật MLPA (theo Jan P. Schouten, 2002)
Ứng dụng MLPA trong ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình
Trong những năm gần đây, MLPA là kỹ thuật đƣợc ƣu tiên chọn lựa trong chẩn đoán đột biến mất đoạn, lặp đoạn gen APC [71], [99]; ngƣời ta thiết kế các probe gắn đặc hiệu với 15 exon của gen. Trong mỗi kỹ thuật PCR, chúng ta có thể khuếch đại đồng thời các probe đặc hiệu cho 15 exon của gen mà chỉ sử dụng duy nhất 1 phản ứng PCR.
Ở nghiên cứu của Jian-Qiu sheng (2010), ông đã tiến hành một phản ứng PCR sử dụng hỗn hợp probe gắn đặc hiệu với các exon [71]. Kết quả nghiên cứu của hai gia đình bệnh nhân đƣợc thể hiện ở hình 1.9. Với kỹ thuật MLPA các tác giả của các nghiên cứu khác cũng đã phát hiện mất đoạn lớn của gen APC ở 8-12 % gia đình thể đa polyp tuyến gia đình.
Exon 11
Exon 11 Exon 10A Exon 10A
Exon 15 Exon 15
Mẫu chứng
Gia đình số 10 mất Exon 15
Gia đình số 11 mất Exon 11 và 10A
Hình 1.9. Kỹ thuật MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen APC (Theo Jian-Qiu
sheng (2010). Mất đoạn exon 15 ở gia đình số 10. Mất đoạn exon 11 và 10A ở gia đình số 11 (đột biến dị hợp tử, độ cao của đỉnh exon bằng ½ so với mẫu đối chứng)