NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.1.2.Phương pháp nuôi cấy tế bào
Phương pháp 1 [39]: Ni cấy trong bình cấy flask
- Chuẩn bị sẳn bình cấy flask ghi thông tin mã số mẫu, ngày cấy, số lô.
- Loại bỏ dịch nổi trong ống ly tâm, giữ lại 0.5 ml cặn tế bào, thêm vào khoảng 0,5 ml môi trường, trộn đều dịch huyền trọc và trải đều vào bình cấy flask.
- Bổ sung cho đủ 4ml môi trường/flask, ủ trong tủ ấm 37oC.
- Sau 5 ngày, kiểm tra và ghi nhận tình trạng mẫu, tiếp tục tiến hành kiểm tra mẫu sau mỗi 2 ngày.
- Thay toàn bộ môi trường nuôi cấy lần 1 khi có ít nhất 1 cụm tế bào kích thước trung bình.
- Thay mơi trường lần 2 khi có ít nhất 5 cụm lớn, độ che phủ mức dày hoặc có ít nhất 3 cụm lớn, độ che phủ mức rất dày và tiến hành thu hoạch vào ngày hôm sau.
Phương pháp 2 [39]: Nuôi cấy in situ trên slide flask
- Chuẩn bị sẳn slide flask ghi thông tin mã số mẫu, ngày cấy, số lô.
- Loại bỏ dịch nổi trong ống ly tâm, giữ lại 0,5 ml cặn tế bào, thêm vào 0,5 ml môi trường, trộn đều dịch huyền trọc để huyền phù tế bào và trải đều vào slide flask.
- Bổ sung cho đủ 2ml môi trường/slide flask, ủ trong tủ ấm 37oC.
- Sau 5 ngày, kiểm tra và ghi nhận tình trạng mẫu, tiếp tục tiến hành kiểm tra mẫu sau mỗi 2 ngày.
- Thay tồn bộ mơi trường nuôi cấy lần 1 khi có ít nhất 1 cụm tế bào kích thước trung bình.
- Thay mơi trường lần 2 khi có ít nhất 3 cụm lớn, độ che phủ ở mức dày và tiến hành thu hoạch vào ngày hôm sau.
Phương pháp 3 [24]: Nuôi cấy in situ trên lá kính trong đĩa petri
- Chuẩn bị sẳn đĩa petri ghi thông tin mã số mẫu, ngày cấy, số lơ, mỗi đĩa petri có lót 2 lá kính 22mm2.
- Loại bỏ dịch nổi trong ống ly tâm, giữ lại khoảng 0,25ml dịch nổi phía trên cặn tế bào, thêm 1ml môi trường, trộn đều dịch huyền trọc và trải vào lá kính.
- Ủ trong tủ ấm 37oC.
- Ngày hôm sau bổ sung thêm 2ml môi trường/đĩa petri.
- Sau 5 ngày, kiểm tra và ghi nhận tình trạng mẫu, tiếp tục tiến hành kiểm tra mẫu sau mỗi 2 ngày.
- Thay 2ml môi trường lần 1 khi có ít nhất 1 cụm tế bào kích thước trung bình. - Thay mơi trường lần 2 khi có ít nhất 3 cụm lớn, độ che phủ ở mức dày và tiến hành thu hoạch vào ngày hôm sau.