3. Nội dung nghiên cứu
2.4.2.Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hƣởng đến quá trình nhân giống
- Ảnh hƣởng của tỷ lệ giống: Bổ sung giống với tỷ lệ 5%, 7,5%, 10%, theo dõi sự sinh trƣởng và phát triển qua xác định OD660nm, CFU/ml
- Ảnh hƣởng của pH môi trƣờng: Điều chỉnh pH môi trƣờng đạt 5,5; 6; 6,5 đối với vi khuẩn L.acidophillus TN. Xác định pH môi trƣờng sau khi nuôi cấy, OD620nm, CFU/ml.
- Ảnh hƣởng của nhiệt độ đến tích lũy sinh khối: Khảo sát khả năng sinh trƣởng và phát triển của R.palustris RD trên môi trƣờng SA lỏng, điều kiện kị khí, chiếu sáng, ủ ở các khoảng nhiệt độ: 20, 25, 30, 35, 40, 45 và 500
C.
- Ảnh hƣởng của thời gian nhân giống: Khả năng sinh trƣởng và phát triển của Bacillus, L.acidophillus TN, R.palustris RD sau 16, 20, 24, 36, 48 giờ đƣợc theo dõi qua xác định pH, OD660nm, CFU/ml
2.4.3. Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hƣởng đến quá trình lên men
- Thành phần lên men chìm Bacillus, L.acidophillus TN, R.palustris RD
thích hợp đƣợc lựa chọn trên cơ sở môi trƣờng nhân giống Bacillus, có thay đổi một số thành phần phù hợp, dễ kiếm, rẻ tiền. Xác định CFU/ml dịch lên men bằng cách phân tích mật độ vi khuẩn trong dịch nuôi bằng cách đếm trên đĩa thạch theo phƣơng pháp của Koch.
- Thời gian lên men Bacillus, L.acidophillus TN, R.palustris RD thích hợp đƣợc nghiên cứu qua theo dõi xác định OD660nm, CFU/ml dịch lên men
- Xác định thành phần lên men L.acidophillus TN trên môi trƣờng xốp thích hợp bằng cách lên men trên cơ chất là nguồn cacbon ( đƣờng sucrose, lactose, glucose, maltose, mannitol); chất mang; bột đậu tƣơng, bột gạo, bột sắn, bột cám với tỷ lệ khác nhau. Xác định CFU/gam chế phẩm lên men.
- Xác định thành phần lên men Bacillus trên môi trƣờng xốp trên nguồn cơ chất bao gồm: đậu tƣơng, bột gạo, bột cám. Xác định CFU/gam chế phẩm lên men.
- Tỷ lệ giống thích hợp để lên men Bacillus trên môi trƣờng xốp đƣợc nghiên cứu: 20%, 25%, 30%, 35%. Xác định CFU/ gam chế phẩm lên men.
- Nhiệt độ lên men Bacillus, L.acidophillus TN trên môi trƣờng xốp thích hợp đƣợc nghiên cứu: 280
C, 300C, 340C, 370C. Xác định CFU/ gam chế phẩm lên men.
- Xác định thời gian lên men Bacillus, L.acidophillus TN trên môi trƣờng xốp thích hợp bằng cách lên men 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8 ngày, xác định CFU/ gam chế phẩm lên men
Thu hồi sinh khối tạo chế phẩm và bảo quản chế phẩm
- Tạo chế phẩm dạng lỏng: Dịch lên men Bacillus đã đƣợc thu hồi, bổ sung L.acidophillus TN và R.palustris RD cũng đƣợc thu hồi và cho thêm chất bảo quản. Kiểm tra độ tinh khiết, chất lƣợng ( CFU/ml chế phẩm: 108
).
- Tạo chế phẩm dạng bột: Chế phẩm lên men Bacillus đã đƣợc sấy khô với nhiệt độ 50, 60, 65, 700C, nghiền, bổ sung chế phẩm lên men L.acidophillus TN cũng đƣợc sấy khô, nghiền nhỏ. Kiểm tra độ tinh khiết, chất lƣợng (CFU/gam chế phẩm: 108
)
- Thành lập công thức bảo quản chế phẩm dạng bột gồm: Bacillus, L.acidophillus TN thêm một số thành phần sau: bột, sucrose, lactose, Na2CO3. Theo dõi độ ổn định 3, 6, 12 tháng.
- Thành lập công thức bảo quản chế phẩm dạng lỏng với các thành phần bảo quản: sucrose; Lactose, Na2S2O3 + Lactose. Theo dõi độ ổn định 3, 6, 12 tháng.