Dụng cụ, trang thiết bị và vật liệu nghiên cứu về gene

Một phần của tài liệu Nghiên cứu sự đột biến gene k RAS và mối liên quan đột biến gene k RAS với một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh ung thư đại trực tràng (Trang 51 - 53)

- M: Di căn xa

ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.6. Dụng cụ, trang thiết bị và vật liệu nghiên cứu về gene

2.2.6.1. Dụng cụ, trang thiết bị

- Máy Gene Amp PCR System 9700 (USA). - Tủ lạnh sâu: -30°C; -80°C (SANYO). - Máy điện di: Mupid (Nhật Bản).

- Máy soi gel và chụp ảnh tự động: Chemidoc EQ-Bio-Rad (USA). - Máy ly tâm lạnh Beckman (USA) và ly tâm để bàn Eppendorf (Đức). - Lò vi sóng (Samsung).

- Máy đọc trình tự gene ABI Prism 3100 Genetic Analyzer (USA).

- Tủ ấm.

Hình 2.1. Máy đ c trình tự gene 3100-Avant Genetic Analyzer (hãng ABI-PRISM, USA)

2.6.2.2. Hoá chất

* Hóa chất dùng để tách chiết DNA (hãng Qiagen – Đức):

- Dung dịch Lysis buffer.

- Dung dịch K.

- Dung dịch SDS 10%. - Proteinase K (10 mg/mL).

- Dung dịch phenol: chloroform : isoamyl với tỷ lệ 25 : 24 : 1. - Dung dịch chloroform : isoamyl với tỷ lệ 24 : 1.

- Ethanol 100% và ethanol 70%. - Sodium acetate 3M, pH = 5,2.

- Dung dịch hòa tan DNA để bảo quản.

Dung dịch Lysis buffer

Hoá chất Nồng độ Thể tích (ml) Sucrose 0,3 M 51,3 Tribase HCl (pH = 7,5) 0,01 M 0,785 MgCl2 0,005 M 0,2375 Trixton X-100 1% (v/v) 5 Chỉnh pH = 7,5 bằng HCl, nước cất vừa đủ 500 ml Dung dịch K Hoá chất Nồng độ Thể tích (ml) NaCl 0,075 M 0,8775 g EDTA 0,024 M 1,7868 g

Chỉnh pH = 8,0 bằng NaOH, nước cất vừa đủ 200 ml

* Hoá chất để thực hiện kỹ thuật PCR (hãng Qiagen – Đức): + 10x buffer.

+ dNTP 10 mM. + Taq polymerase.

+ Các cặp mồi (xuôi và ngược).

+ Agarose.

+ Dung dịch TBE 10X (Tris; acid boric; EDTA). + Loading buffer 10X.

+ Ethidium bromide.

* Hoáchất để tinh sạch sản phẩm PCR từ gel agarose (hãng Qiagen – Đức): + Dung dịch QC.

+ Dụng dịch Sodium acetat. + Dung dịch Isopropanol. + Dung dịch QG.

+ Cột QIA.

* Hoá chất để đọc trình tự gene (hãng Applied Biosystems – USA): + Big dye.

+ Cột lọc.

+ SAM solution.

+ Terminator Solution.

Một phần của tài liệu Nghiên cứu sự đột biến gene k RAS và mối liên quan đột biến gene k RAS với một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh ung thư đại trực tràng (Trang 51 - 53)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(137 trang)