- M: Di căn xa
ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.6. Dụng cụ, trang thiết bị và vật liệu nghiên cứu về gene
2.2.6.1. Dụng cụ, trang thiết bị
- Máy Gene Amp PCR System 9700 (USA). - Tủ lạnh sâu: -30°C; -80°C (SANYO). - Máy điện di: Mupid (Nhật Bản).
- Máy soi gel và chụp ảnh tự động: Chemidoc EQ-Bio-Rad (USA). - Máy ly tâm lạnh Beckman (USA) và ly tâm để bàn Eppendorf (Đức). - Lò vi sóng (Samsung).
- Máy đọc trình tự gene ABI Prism 3100 Genetic Analyzer (USA).
- Tủ ấm.
Hình 2.1. Máy đ c trình tự gene 3100-Avant Genetic Analyzer (hãng ABI-PRISM, USA)
2.6.2.2. Hoá chất
* Hóa chất dùng để tách chiết DNA (hãng Qiagen – Đức):
- Dung dịch Lysis buffer.
- Dung dịch K.
- Dung dịch SDS 10%. - Proteinase K (10 mg/mL).
- Dung dịch phenol: chloroform : isoamyl với tỷ lệ 25 : 24 : 1. - Dung dịch chloroform : isoamyl với tỷ lệ 24 : 1.
- Ethanol 100% và ethanol 70%. - Sodium acetate 3M, pH = 5,2.
- Dung dịch hòa tan DNA để bảo quản.
Dung dịch Lysis buffer
Hoá chất Nồng độ Thể tích (ml) Sucrose 0,3 M 51,3 Tribase HCl (pH = 7,5) 0,01 M 0,785 MgCl2 0,005 M 0,2375 Trixton X-100 1% (v/v) 5 Chỉnh pH = 7,5 bằng HCl, nước cất vừa đủ 500 ml Dung dịch K Hoá chất Nồng độ Thể tích (ml) NaCl 0,075 M 0,8775 g EDTA 0,024 M 1,7868 g
Chỉnh pH = 8,0 bằng NaOH, nước cất vừa đủ 200 ml
* Hoá chất để thực hiện kỹ thuật PCR (hãng Qiagen – Đức): + 10x buffer.
+ dNTP 10 mM. + Taq polymerase.
+ Các cặp mồi (xuôi và ngược).
+ Agarose.
+ Dung dịch TBE 10X (Tris; acid boric; EDTA). + Loading buffer 10X.
+ Ethidium bromide.
* Hoáchất để tinh sạch sản phẩm PCR từ gel agarose (hãng Qiagen – Đức): + Dung dịch QC.
+ Dụng dịch Sodium acetat. + Dung dịch Isopropanol. + Dung dịch QG.
+ Cột QIA.
* Hoá chất để đọc trình tự gene (hãng Applied Biosystems – USA): + Big dye.
+ Cột lọc.
+ SAM solution.
+ Terminator Solution.