Phần 3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.2.Thời gian nghiên cứu
- Từ tháng 6/2016 đến tháng 5 /2017. 3.3. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
* Rươi thí nghiệm
- Lồi Rươi Tylorrhynchus heterochaetus (Quatrefages, 1865).
- Thực hiện trong 3 giai đoạn : Giai đoạn xuống đáy, giai đoạn trưởng thành, giai đoạn nuôi vỗ thành thục.
* Dụng cụ thí nghiệm
Nhiệt độ: Đo bằng nhiệt kế thuỷ ngân, đo nhiệt độ 2 lần/ ngày (6h và 14h). Hàm lượng ôxy hồ tan: Dùng máy đo ơxy, đo 2 lần/ ngày (6h và 14h). pH: Dùng test pH đo, 2 ngày/ lần.
NH3: Đo bằng test kit của Sera (Đức). S‰: Máy đo độ mặn
Kính hiển vi điện tử
Bể: Bể xi măng, bể composite 3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thí nghiệm1. Ảnh hưởng của thức ăn lên tỷ lệ thành thục Rươi bố mẹ được trình bày trong hình 3.1.
Thí nghiệm bao gồm 3 nghiệm thức (NT) khác nhau về thức ăn: NT1: tảo đáy, NT2: thức ăn tổng hợp (Lansy, Fripak, NRD Inve) và NT3: là thức ăn kết hợp 2 loại thức ăn trên.
Bổ sung Vitamine C, E 1 tuần/lần, cho ăn 2 lần (sáng, chiều)/ngày, lượng ăn 5-10% khối lượng thân (đối với thức ăn tổng hợp). Thí nghiệm được tiến hành trong bể nuôi, mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần.
Mật độ nuôi: nuôi thương phẩm Rươi trong bể xi măng có diện tích 1,5 m2 với mật độ 100 con/ m2. Cho ăn 5-10% trọng lượng thân/ ngày, hàng ngày cho ăn 2 lần vào buổi sáng và buổi chiều, chế độ chăm sóc quản lý như nhau giữa các nghiệm thức.
Kiểm tra các yếu tố mơi trường thường xun 3 ngày/ lần
Hình 3.1.Sơ đồ bố trí thí nghiệm về ảnh hưởng của thức ăn lên tỷ lệ thành thục Rươi bố mẹ
Thí nghiệm 2. Ảnh hưởng của mật độ lên tỷ lệ thành thục Rươi bố mẹ được trình bày trong hình 3.2.
Thí nghiệm bao gồm 4 nghiệm thức khác nhau về mật độ nuôi: TN1:500 con/m2, NT2:600 con/m2, NT3:700 con/m2; NT4:800 con/m2.
Thí nghiệm được tiến hành trong bể, mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần, thức ăn sử dụng từ kết quả của thí nghiệm 1.
Tất cả các thí nghiệm 1, 2 được thực hiện trên Rươi trưởng thành thu thập từ tự nhiên, thí nghiệm kéo dài cho đến khi có nghiệm thức đạt tỷ lệ thành thục
70%. Xác định tỷ lệ sống và tỷ lệ thành thục ở từng nghiệm thức. + Kỹ thuật chăm sóc và quản lý sức khỏe Rươi trong bể nuôi;
- Thay nước, vệ sinh bể nuôi, kiểm tra các thông số môi trường theo định kỳ. - Hàng ngày kiểm tra hoạt động bắt mồi của Rươi.
+ Theo dõi bệnh thường gặp Rươi bố mẹ nuôi vỗ và biện pháp phòng, trị bệnh.
Theo dõi những cá thể có dấu hiện bệnh lý: mơ tả dấu hiệu, lấy mẫu phân tích ở phịng thí nghiệm để xác định tác nhân gây bệnh là nấm, vi khuẩn hay ký sinh trùng từ đó có biện pháp phịng và trị bệnh hợp lý.
+ Xác định sự phát triển của tuyến sinh dục Rươi;
Đánh giá mức độ thành thục của Rươi nuôi vỗ theo định kỳ 5 ngày/lần. Thí nghiệm thực hiện từ tháng 6 năm 2016, Rươi được lấy từ đầm tự nhiên (Tại hộ anh Hồng Xn Giang xã Hịa Bình, Vĩnh Bảo, Hải Phịng)
Nguồn Nước được lấy tại Trạm nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản nước lợ Quý Kim
Tồn bộ nước trước khi dùng trong thí nghiệm đều được lọc qua hệ thống lọc sinh học: Gồm 5 lớp lọc
Trong q trình thí nghiệm theo dõi sinh trưởng, theo dõi tỷ lệ sống của Rươi trong thí nghiệm 1&2. Đề tài kết hợp theo dõi và đánh giá tỷ lệ thành thục và sức sinh sản của Rươi ở mật độ nuôi và các loại thức ăn khác nhau để làm tiền đề cho nghiên cứu sau này.
Hình 3.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng của mật độ lên tỷ lệ thành thục Rươi bố mẹ
Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng của thức ăn lên sinh trưởng và tỷ lệ sống của Rươi (giai đoạn rươi xuống đáy). Trình bày trong hình 3.5, thực hiện từ tháng 2 đến tháng 4 năm 2017
Rươi bố trí thí nghiệm 3&4 được lấy từ kết quả cho đẻ nhân tạo của q trình ni vỗ thành thục trong thí nghiệm 1&2.
+ Sau khi ấu trùng đạt cỡ 3 – 5 tia cứng bắt đầu xuống đáy chuyển ra ương trong bể composite có đáy là bùn, cát theo tỷ lệ (7:3). Bố trí thí nghiệm với các nghiệm thức thức ăn khác nhau bao gồm:
Nghiệm thức 1 (NT1): Thức ăn tổng hợp các loại (Lansy, Fripak, NRD Inve); Nghiệm thức 2 (NT2): Các loại thức ăn có nguồn gốc từ mùn bã hữu cơ (bột các loại ngũ cốc) và nghiệm thức 3 (NT3) : Tổng hợp của hai loại thức ăn trên (Thức ăn tổng hợp các loại + thức ăn có nguồn gốc từ mùn bã hữu cơ).
Cả ba nghiệm thức đều thực hiện cùng mật độ 300/l.
Hình 3.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm về ảnh hưởng thức ăn lên sinh trưởng và tỷ lệ sống của rươi giai đoạn xuống đáy
+ Hàng ngày cho ấu trùng ăn 4 lần, liều lượng cho ăn có thể điều chỉnh theo khả năng sử dụng thức ăn hàng ngày.
+ Thí nghiệm được kéo dài cho đến khi ấu trùng đạt kích cỡ >1cm/con, xác định tỷ lệ sống, sinh trưởng của ấu trùng ở tất cả nghiệm thức.
+ Kiểm tra các yếu tố mơi trường để có phương pháp xử lý.
Thức ăn tổng hợp
Tổng hợp các loại thức ăn trên Thức ăn mùn
bã hữu cơ
B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9
- Tốc độ sinh trưởng của Rươi - Tỉ lệ sống của ấu trùng
Tìm ra loại thức ăn thích hợp nhất cho sự phát triển của Rươi
Thí nghiệm 4. Ảnh hưởng của mật độ lên sinh trưởng và tỷ lệ sống của Rươi (giai đoạn rươi xuống đáy). Trình bày trong trình 3.6, thực hiện từ tháng 2 đến tháng 4 năm 2017
+Ấu trùng được ương ở 4 mật độ khác nhau: 50 con/l; 100 con/l; 200 con/l; 300 con/l. Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần.
Hình3.6. Sơ đồ bố trí thí nghiệm về ảnh hưởng mật độ lên sinh trưởng và tỷ lệ sống của rươi giai đoạn xuống đáy
Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên xác định mật độ của Rươi + Thức ăn cho ấu trùng ăn từ kết quả của thí nghiệm 3
Mật độ ương ni ấu trùng Rươi
50con/l 100con/l 200con/l 300con/l
B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 B1010 B111 B12
- Tốc độ sinh trưởng của Rươi -Tỷ lệ sống của Rươi
Tìm ra mật độ ương ni phù hợp.
+Thí nghiệm được kéo dài cho đến khi con giống đạt kích cỡ >1cm/con, xác định tỷ lệ sống, sinh trưởng của ấu trùng ở tất cả nghiệm thức.
Thức ăn ương nuôi được sử dụng từ kết quả nghiên cứu trên (Thí nghiệm 3). Sử dụng mùn bã hữu cơ kết hợp với thức ăn tổng hợp, duy trì mật độ tảo trong bể ương: 103 tb/ml (cho ăn 2 lần/ngày). Liều lượng cho ăn thức ăn tổng hợp: 1,5 – 2,5 mg/ bể 300 lít nước và lượng thức ăn tổng hợp được điều chỉnh theo sự tăng trưởng của đối tượng nuôi. Hàng ngày cho ăn 2 lần. Mật độ ương nuôi 500 con/L. Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần.
Kiểm tra thường xun các yếu tố mơi trường Chăm sóc và quản lý sức khỏe ấu trùng và bể nuôi
+ Chế độ siphon thay nước cho bể ương nuôi tuỳ thuộc vào tình trạng sức khoẻ của ấu trùng, chất lượng nước trong bể ương mà có chế độ siphon thay nước hợp lý. Hàng ngày theo dõi các yếu tố mơi trường, duy trì nhiệt độ 26-30ºC (đảm bảo sự biến động nhiệt độ nước bể nuôi <1ºC/ngày đêm), pH 8,2-8,6, DO> 5mg/l trong suốt quá trình ương ni.
+ Hàng ngày theo dõi tình trạng sức khỏe, khả năng lọc/bắt mồi của ấu trùng.
+ Xác định các giai đoạn biến thái của ấu trùng
+ Định kỳ thu mẫu hàng ngày ấu trùng (30 con/lần) trong bể ương, cố định mẫu và quan sát bằng kính hiển vi xác định các chỉ tiêu hình thái để phân loại các giai đoạn biến thái.
+ Các chỉ tiêu phân loại các giai đoạn biến thái: chiều dài thân, các tia cứng, các đốt sinh trưởng, các phần phụ.
3.5. PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CHỈ TIÊU CẦN THEO DÕI 3.5.1. Phương pháp theo dõi tốc độ tăng trưởng của ấu trùng 3.5.1. Phương pháp theo dõi tốc độ tăng trưởng của ấu trùng
Hai ngày tiến hành thu mẫu 1 lần ở các lơ thí nghiệm vào buổi sáng (6h). Mỗi bể thu 3 mẫu, mỗi mẫu thu đo 30 ấu trùng bằng trắc vi thị kính trên kính hiển vi có độ phóng đại 10 x7.
Xác định sự tăng trưởng và phát triển của ấu trùng Rươi + Xác định sự tăng trưởng:
- Mỗi lơ thí nghiệm, theo dõi tốc độ sinh trưởng dựa vào hai chỉ tiêu chiều dài (L) và số đốt cơ thể, thu mỗi lô 30 mẫu kiểm tra chỉ tiêu chiều dài L (mm) và số đốt cơ thể.
+ Xác định kích thước của ấu trùng:
Giai đoạn ấu trùng trôi nổi và ấu trùng xuống đáy được đo trên máy đo kích thước + Xác định sự phát triển của ấu trùng:
- Theo dõi sự phát triển của ấu trùng thông qua việc theo dõi thời gian chuyển giai đoạn, với quy ước cứ 50% số cá thể trong lơ thí nghiệm đã chuyển sang giai đoạn kế tiếp.
- Thời gian tính bằng giờ (giờ): T = T2 – T1 T: là thời gian chuyển giai đoạn của ấu trùng T2: là thời gian chuyển giai đoạn ở lần kế tiếp. T1: là thời gian chuyển giai đoạn ở lần trước.
- Tính tốc độ tăng trưởng tương đối ngày theo chiều dài
1 2 1 2 ln ln T T L L CL
L2: chiều dài thời điểm T2 (mm) L1: chiều dài thời điểm T1 (mm)
CL : tốc độ tăng trưởng tương đối ngày theo chiều dài - Tính tốc độ tăng trưởng phần trăm theo chiều dài
1 1 2 % L L L L *100
L%: chiều dài tính theo phần trăm
L2: chiều dài ấu trùng tại thời điểm thu
L1: chiều dài ấu trùng tại lần đo đầu tiên 3.5.2. Phương pháp xác định tỉ lệ sống
Dùng phương pháp thể tích: định kỳ 2 ngày/lần sau khi thay nước và vệ sinh bể dùng cốc đong và pipet 1 ml để thu mẫu.Mẫu được đếm trong 1 ml bằng
buồng đếm luân trùng, đếm 3 lần cho 1 lần lấy mẫu. Kết quả cuối cùng là trung bình của 3 lần đếm. Số lượng ấu trùng được tính bằng đơn vị con/ml.
Tỉ lệ sống (TLS %) của ấu trùng được xác định theo công thức sau: Số lượng ấu trùng tại thời điểm i
TLS (%) = x 100 Số lượng ấu trùng ban đầu
3.5.3. Phương pháp xử lý số liệu
- Số liệu thu thập được xử lý trên phần mềm Microsoft Excel - ANOVA và phần mềm SPSS 16.0.Các số liệu trình bày trong bài được ghi dưới dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn.
PHẦN 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
Trong q trình thực hiện bố trí thí nghiệm, đề tài đã kết hợp kiểm tra các yếu tố mơi trường để tìm hiểu thêm mức độ ảnh hưởng tới mật độ và tỷ lệ sống của rươi. Để đánh giá them để sau này phục vụ cho nghiên cứu tiếp theo.
4.1. MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG TRONG HỆ THỐNG BỂ NUÔI VỖ THÀNH THỤC RƯƠI VỖ THÀNH THỤC RƯƠI
Số liệu thu được cho thấy, các yếu tố môi trường gồm nhiệt độ, oxy hịa tan, độ mặn, pH ni nằm trong ngưỡng cho phép theo tiêu chuẩn mơi trường Việt Nam đối với các lồi hải sản nuôi (Bảng 4.1). Hàm lượng NH3-N và H2S không có sự khác biệt đáng kể giữa các nghiệm thức thí nghiệm và đều nằm trong khoảng cho phép.
Bảng 4.1. Biến động một số yếu tố mơi trường trong q trình thí nghiệm
Các yếu tố môi trường NT1 NT2 NT3
Nhiệt độ (oC) 25,5 – 27,5 25,5 – 27,5 25,5 – 27,5 Độ mặn (‰) 0-5 0-5 0-5 pH 7,8 – 8,4 7,8 – 8,3 7,8 – 8,4 NH3-N (mg/L)* 0,01 ± 0,01 0,01 ± 0,01 0,02 ± 0,01 DO (mg/L) 5 – 7 5- 7 5 – 7 H2S(mg/L)* 0,006±0,001 0,006±0,001 0,005±0,001
Ghi chú: Số liệu trên bảng là giá trị TB±SD.
Trong tự nhiên Rươi là lồi rộng muối có thể sinh trưởng ở độ mặn 0-5‰ nhưng khoảng độ mặn thích hợp dao động từ 2 – 3‰ (Tosuji and Sato, 2006). 4.2. KẾT QUẢ NUÔI VỖ THÀNH THỤC RƯƠI BẰNG LOẠI THỨC ĂN KHÁC NHAU
4.2.1. Sinh trưởng của Rươi nuôi thành thục
Kết quả ảnh hưởng của thức ăn đến sinh trưởng về khối lượng của Rươi ni thí nghiệm cho thấy, trong thời gian nuôi vỗ thành thục Rươi tiếp tục tăng trưởng về khối lượng thể hiện trong Bảng 4.2.
Bảng 4.2. Sinh trưởng về khối lượng (g/con) của Rươi nuôi thành thục.
Ngày nuôi Tảo đáy, mùn bã hữu cơ NT1 Thức ăn tổng hợp NT2 T.A kết hợp NT3
Ban đầu 0,42 ± 0,206 15 0,437 ± 0,013 bc 0,396 ± 0,027 a 0,502 ± 0,018 b 30 0,527 ± 0,015c 0,493 ± 0,036 a 0,566± 0,052 b 45 0,652 ± 0,012 c 0,522 ± 0,017 a 0,617 ± 0,047b 60 0,725 ± 0,007 c 0,561 ± 0,005a 0,653± 0,026 b 75 0,804 ± 0,005 b 0,593 ± 0,027 a 0,728± 0,035 b 90 0,843 ± 0,023 bc 0,633 ± 0,042 a 0,862± 0,047b
Ghi chú: Các giá trị thể hiện trên bảng là giá trị trung bình và độ lệch chuẩn. Các giá trị trên cùng một hàng có ký tự giống nhau thì khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05).
Kết quả sau 90 ngày nuôi vỗ thành thục Rươi bố mẹ cho thấy, việc sử dụng thức ăn khác nhau thì tốc độ tăng trưởng của Rươi nuôi không giống nhau (p<0,05). Thức ăn kết hợp và thức ăn tảo đáy, mùn bã hữu cơ cho tốc độ tăng trưởng tốt hơn so với thức ăn tổng hợp. Tốc độ sinh trưởng trung bình về khối lượng của Rươi nuôi khi cho ăn bằng thức ăn tổng hợp kết hợp mùn bã hữu cơ đạt kết quả cao nhất 0,862g/con và thấp nhất ở nghiệm thức sử dụng thức ăn tổng hợp 0,633 g/ con. Điều này cho thấy chỉ riêng thức ăn tổng hợp không phù hợp cho sự sinh trưởng của Rươi.
4.2.2. Tỷ lệ sống của Rươi nuôi vỗ
Tỷ lệ sống là một trong những chỉ tiêu quan trọng đánh giá sự tác động của thức ăn lên Rươi. Việc sử dụng loại thức ăn thích hợp sẽ giúp cho Rươi khỏe mạnh và phát triển tốt hơn.
NT1: Sử dụng thức ăn tảo đáy, mùn bã hữu cơ, NT2: Thức ăn tổng hợp, NT3: Thức ăn kết hợp 2 loại thức ăn trên. Thí nghiệm thực hiện cùng mật độ: 100c/m2.
Sau 90 ngày nuôi vỗ thành thục, tỷ lệ sống của Rươi ở các nghiệm thức 1, 2 và 3 đạt lần lượt là 66,63%; 64,03% và 64,33% khác nhau khơng có ý nghĩa (p>0,05) giữa các nghiệm thức. Nghiệm thức 2 (Rươi được cho ăn thức ăn tổng hợp) có tỷ lệ sống (64,03%) thấp hơn có ý nghĩa thống kê (p<0,05) so với các nghiệm thức 1, 3. Sử dụng thức ăn tổng hợp (NT2) cho tỷ lệ sống của Rươi thấp nhất có thể là do đây là nguồn thức ăn có giá trị dinh dưỡng cao nhưng chưa đáp ứng đủ về nhu cầu của Rươi, mặc dù khi xác định thành phần thức ăn trong hệ tiêu hóa của Rươi có sự tồn tại các mảnh mùn bã hữu cơ.
4.2.3. Tỷ lệ thành thục của Rươi
Trong q trình ni vỗ tuỳ theo từng giai đoạn ni mà có chế độ cho ăn khác nhau. Trong nuôi vỗ thành thục thức ăn là nguồn nguyên liệu hết sức cần thiết cho sự phát triển của tuyến sinh dục. Trong điều kiện ni nhốt Rươi là lồi ăn tạp chúng có thể ăn tất cả những loại thức ăn do con người cung cấp. Do vậy, chế độ dinh dưỡng tốt có thể làm cho Rươi thành thục và sinh sản sớm.
Hình 4.2. Tỷ lệ Rươithành thục ở các giai đoạn
Kết quả sau 90 ngày nuôi vỗ, tỷ lệ Rươi cái thành thục ở các giai đoạn khác nhau sử dụng thức ăn khác nhau có sự sai khác có ý nghĩa thống kê (p<0,05. Tỷ lệ này đạt cao nhất ở nghiệm thứcsử dụng thức ăn tổng hợp kết hợp với mùn bã
hữu cơ, ở các giai đoạn phát triển I, II, III và IV (tương ứng 7,8%; 6,87%; 6,27 và 5,93%) và thấp nhất là nghiệm thức sử dụng thức ăn tổng hợp (tương ứng 5,4%; 4,47%;3,47và 2,73%). Kết quả này cũng tương đối phù hợp với kết quả nghiên cứu của Nesto và cs. (2012) khi sử dụng thức ăn tổng hợp làm thức ăn cho loài Rươi H. diversicolor sau khi kết thúc thí nghiệm số lượng cá thể thành thục ở giai đoạn II và III thấp và không thấy xuất hiện cá thể thành thục giai đoạn