Virus cúm A phân nhóm H5N1, H5N6 có tính thích ứng lây nhiễm cao với biểu mô đường hô hấp, hơn nữa đây là loại virus sống kí sinh nội bào bắt buộc nên quá trình xâm nhiễm và nhân lên chủ yếu xảy ra ở đường hô hấp, đường tiêu hóa của cơ thể nhiễm (Murphy and Webster, 1996; Nicholson et al.,2003), có những nét đặc trưng như sau:
Virus cúm A phân nhóm H7N9 là một serotype (kiểu huyết thanh) của virus cúm A. H7 thường lây truyền giữa các loài gia cầm với một số biến thể có khả năng lây sang người. Hầu hết các trường hợp được báo cáo nhiễm ở người người đều dẫn đến bệnh hô hấp nặng
Quá trình xâm nhiễm của virus cúm A được mở đầu bằng sự kết hợp của HA và thụ thể thích ứng của nó trên bề mặt các tế bào này, cuối cùng giải phóng hệ gen của virus vào trong bào tương của tế bào nhiễm.
Quá trình nhân lên của RNA virus cúm A chỉ xảy ra trong nhân của tế bào, đây là đặc điểm khác biệt so với nhiều virus khác (quá trình này xảy ra trong nguyên sinh chất), cuối cùng là giải phóng các hạt virus ra khỏi tế bào nhiễm nhờ vai trò của enzyme neuraminidase. Thời gian một chu trình xâm nhiễm và giải phóng các hạt virus mới của virus cúm chỉ khoảng vài giờ (trung bình 6 giờ). Sự tạo thành các hạt virus mới không phá tan tế bào nhiễm, nhưng các tế bào này bị rối loạn hệ thống tổng hợp các đại phân tử, rơi vào quá trình chết theo chương trình (apoptosis) làm tổn thương mô của cơ thể vật chủ (Webster, 1998; Uiprasertkul et al., 2007).
Sau khi được giải phóng vào trong bào tương tế bào nhiễm, hệ gen của virus sử dụng bộ máy sinh học của tế bào tổng hợp các protein của virus và các RNA vận chuyển phụ thuộc RNA (RNA - dependent RNA transcription). Phức hợp protein -RNA của virus được vận chuyển vào trong nhân tế bào (Basler, 2007).
Trong nhân tế bào, các RNA hệ gen của virus tổng hợp nên các sợi dương từ khuôn là sợi âm của hệ gen virus, từ các sợi dương này chúng tổng hợp nên RNA hệ gen của virus mới nhờ RNA - polymerase. Các sợi này không được adenine hóa ở đầu 5’- và 3’-, chúng kết hợp với nucleoprotein (NP) tạo thành phức hợp ribonucleoprotein (RNP) hoàn chỉnh và được vận chuyển ra bào tương tế bào. Đồng thời, các RNA thông tin của virus cũng sao chép nhờ hệ thống enzyme ở từng phân đoạn gen của virus, và được enzyme PB2 gắn thêm 10 – 12 adenin ở đầu 5’- sau đó được vận chuyển ra bào tương và dịch mã tại lưới nội bào có hạt để tổng hợp nên các protein của virus.
Các phân tử NA và HA của virus sau khi tổng hợp được vận chuyển gắn lên mặt ngoài của màng tế bào nhiễm nhờ bộ máy Golgi, gọi là hiện tượng “nảy chồi” của virus. NP sau khi tổng hợp được vận chuyển trở lại nhân tế bào để kết hợp với RNA thành RNP của virus. Sau cùng các RNP của virus được hợp nhất với vùng “nảy chồi”, tạo thành các “chồi” virus gắn chặt vào màng tế bào chủ bởi liên kết giữa HA với thụ thể chứa sialic acid. Các NA phân cắt các liên kết này và giải phóng các hạt virus trưởng thành tiếp tục xâm nhiễm các tế bào khác (Murphy and Webster, 1996).
Hình 2.4. Quá trình xâm nhập và nhân lên trong tế bào vật chủ
Nguồn: Internet 2.2.6. Sức đề kháng của virus
Virus cúm type A tương đối nhạy cảm với các hóa chất và các tác nhân vật lý. Các hạt virus tồn tại thích hợp pH trong khoảng 6,5 - 7,9, khả năng lây
nhiễm của virus giảm ở pH quá cao hay quá thấp. Lớp vỏ bên ngoài có bản chất là lipid nên dễ bị phá hủy bởi các dung môi hòa tan lipid, các chất tẩy rửa và các chất sát trùng: fomaldehyde, phenol, β - propiolacton, sodium hypochlorite, acid loãng và hydroxylamine. Các hóa chất này thường được dùng để tẩy uế chuồng trại, dụng cụ và các thiết bị chăn nuôi (Capua, 2000).
Virus bị bất hoạt dưới ánh sáng trực tiếp sau 40 giờ, tồn tại được 15 ngày ánh sáng thường. Tia tử ngoại bất hoạt được virus mà không phá hủy được kháng nguyên virus. Tuy nhiên, virus cúm A dễ bị tiêu diệt hoàn toàn ở 1000C và 600C trong 30 phút. Trong phân gia cầm, virus tồn tại ít nhất 3 tháng ở nhiệt độ thấp; Trong các cơ quan, virus có thể tồn tại 24 - 39 ngày, nếu bảo quản ở nhiệt độ -700C thì có thể tồn tại hàng năm. Trong thức ăn, nước uống bị ô nhiễm virus có khả năng tồn tại hàng tuần. Đây chính là nguồn mang mầm bệnh nguy hiểm và tiềm tàng để làm lây lan dịch bệnh (Lê Văn Năm, 2004; Murphy and Webster, 1996).
2.3. DỊCH TỄ HỌC. 2.3.1. Động vật cảm nhiễm
Tất cả các loại gia cầm và chim hoang dã (đặc biệt là thủy cầm di trú) đều mẫn cảm với virus cúm type A. Bệnh thường phát hiện khi lây nhiễm cho gia cầm (gà, vịt, gà tây, chim cút). Phần lớn các loại gia cầm non đều mẫn cảm. Ngoài ra, virus cúm type A có thể gây bệnh cho các loài động vật có vú như lợn, ngựa, thú hoang dã và người.
Các loại thủy cầm với virus cúm A được coi là vật chủ mắc bệnh (tuy nhiên còn phụ thuộc vào độc lực của virus).
Các loại gà, đà điểu khi bị nhiễm thường phát bệnh rất nặng và bài thải virus ra môi trường, chúng được xem như các vật chủ hứng chịu.
2.3.2. Con đường truyền lây
Khi gia cầm bị nhiễm virus cúm, virus được nhân lên trong đường hô hấp và đường tiêu hóa. Sự truyền lây bệnh được thực hiện theo hai phương thức trực tiếp và gián tiếp:
Lây trực tiếp do vật mẫn cảm tiếp xúc với con vật mắc bệnh thông qua các hạt khí dung được bài tiết từ đường hô hấp hoặc qua phân, thức ăn, nước uống bị nhiễm. Lây gián tiếp qua các hạt khí dung trong không khí với khoảng cách gần hoặc những công cụ chứa virus do gia cầm mắc bệnh bài thải qua phân hoặc lây qua chim thú, thức ăn, nước uống, lồng nhốt, quần áo, xe vận chuyển. Đây là phương thức lây truyền chủ yếu
Như vậy virus cúm dễ lây truyền tới những vùng khác do con người, phương tiện vận chuyển, dụng cụ chăn nuôi... Đối với các virus cúm độc lực cao thì sự lây truyền chủ yếu qua phân, đường miệng (Trần Hữu Cổn và Bùi Quang Anh, 2004).
Hình 2.5. Mối quan hệ lây nhiễm và thích ứng các loại vật chủ của virus cúm A Nguồn: Internet 2.3.3. Mùa phát bệnh
Bệnh Cúm gia cầm xảy ra quanh năm, nhưng thường tập trung vào vụ đông xuân từ tháng 10 năm trước đến tháng 2 năm sau. Khi có những biến đổi bất lợi về điều kiện thời tiết như nhiệt độ lạnh, độ ẩm cao, thời tiết biến đổi đột ngột, làm giảm sức đề kháng tự nhiên của con vật. Mặt khác thời điểm này có mật độ chăn nuôi cao nhất trong năm, các hoạt động buôn bán vận chuyển, giết mổ gia cầm diễn ra cao nhất trong năm cũng là điều kiện thuận lợi để dịch bệnh phát sinh và lây lan.
2.4. TRIỆU CHỨNG VÀ BỆNH TÍCH 2.4.1. Triệu chứng 2.4.1. Triệu chứng
Thời gian nung bệnh từ vài giờ đến 3 ngày tùy thuộc vào số lượng, độc lực của virus, đường nhiễm bệnh, loài cảm nhiễm virus gây bệnh. Một số nghiên cứu cho thấy thời gian ủ bệnh trong nhiều trường hợp có thể dài hơn đến 7 ngày và lâu nhất là 14 ngày.
Toàn đàn ũ rủ, lông xù, xơ xác. Nếu nhiễm virus độc lực cao thì gà chết đột ngột, không có biểu hiện triệu chứng lâm sàng, tỷ lệ tử vong cao có khi đến 100% trong vài ngày.
Có các biểu hiện về đường hô hấp thường xuất hiện đầu tiên và khá điển hình như ho khẹc, hắt hơi, thở khò khè, vảy mỏ, chảy nhiều nước mũi, nước mắt.
Mi mắt bị viêm, mặt phù nề, sưng mọng và có chiều hướng lan xuống cổ và ức do vậy gà bệnh có động tác vươn cổ ra để thở.
Mào dày lên do thủy thũng, tím tía, có nhiều điểm xuất huyết. Thịt gà bị bệnh thường thâm xám, dưới da vùng chân có điểm xuất huyết.
Bên cạnh các triệu chứng về đường hô hấp, gia cầm bị bệnh còn có triệu chứng thần kinh: đi lại không bình thường, run rẩy, mệt mỏi, nằm lì bì, tụ thành đống với nhau. Ngoài ra, gia cầm bị bệnh thường tiêu chảy mạnh, phân loãng trắng xanh, sản lượng trứng giảm (Lê Văn Năm, 2004).
2.4.2. Bệnh tích
Bệnh tích rất đa dạng, với các đặc trưng chủ yếu sau: Mào, yếm sưng to, tím sẫm, phù mí mắt.
Phù keo nhầy và xuất huyết cơ đùi (phần giáp đầu gối). Da chân xung huyết, đỏ sẫm.
Dạ dày cơ xuất huyết, đôi khi xuất huyết dạ dày tuyến.
Niêm mạc khí quản, đường tiêu hóa viêm cata và viêm tơ huyết. Khí quản phù, chứa nhiều dịch nhầy. Dịch nhầy có thể đông đặc. Ruột viêm cata và xuất huyết. Hạch ruột sưng.
Lách, gan, thận, phổi sưng to, hoại tử màu vàng, màu xám. Mỡ vành tim xuất huyết, gà trống xuất huyết bên trong dịch hoàn. Gà mái đẻ viêm ống dẫn trứng, vỡ trứng non.
Tuyến tụy xuất huyết và hoại tử, chuyển sang màu vàng có vết sẫm.
2.5. CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN
Việc chẩn đoán Cúm gia cầm do nhiễm virus cúm type A chủ yếu phải phân lập và định danh virus kết hợp với chẩn đoán dựa vào triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể, dịch tễ học và một số phản ứng huyết thanh học.
2.5.1. Dựa vào đặc điểm dịch tễ
thường là gia cầm và chim. Chim hoang dã là nguồn truyền lây bệnh. Một số động vật có vú cũng có thể mắc bệnh: người, lợn, ngựa...
2.5.2. Dựa vào triệu chứng, bệnh tích
Triệu chứng
Gia cầm bị bệnh thường bị xù lông, ũ rũ, bỏ ăn, giảm đẻ; đầu, mặt sưng, phù quanh mắt. Mào yếm sưng, xuất huyết; Mắt bị viêm kết mạc và có thể bị xuất huyết;chân giữa vùng bàn và khuỷu bị xuất huyết;gia cầm bệnh có các triệu chứng hô hấp;Nếu virus có độc lực cao, gia cầm có thể chết nhanh, thường trong vòng 24 giờ - 48 giờ sau khi xuất hiện các triệu chứng đầu tiên.
Bệnh tích
Xuất huyết lan tràn ở các cơ quan nội tạng;dưới da vùng đầu, cổ, ngực bị phù thũng; miệng chứa nhiều dịch; khí quản xuất huyết chứa nhiều dịch nhầy; đường tiêu hóa xuất huyết; với gà đẻ buồng trứng xuất huyết hoặc bị viêm, có nhiều trứng non vỡ.
2.5.3. Phân lập virus
Đây là phương pháp chẩn đoán cơ bản có ý nghĩa quyết định.
Để phân lập virus thường sử dụng mẫu bệnh phẩm là phổi, khí quản, não, lách. Bệnh phẩm sau xử lý được tiêm vào phôi gà 9 - 11 ngày tuổi, ấp 37oC trong 7 ngày thì thu hoạch trứng (virus cũng có thể phân lập trên môi trường tế bào).
Sau khi phân lập được virus từ môi trường tế bào hoặc trên phôi trứng thì có thể giám định virus bằng các phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI test) để giám định subtype H và N.
Phương pháp Realtime RT - PCR trực tiếp phát hiện gen của virus cúm A/H5N1, A/H5N6 và H7N9 trong mẫu bệnh phẩm đã được đưa vào ứng dụng cho phép chẩn đoán nhanh, chính xác, với độ tin cậy cao và phân biệt được sự hiện diện của các chủng virus cúm A gây bệnh chỉ với một lượng nhỏ mẫu bệnh phẩm xét nghiệm. Ngoài ra còn có các phương pháp chẩn đoán khác như: kỹ thuật ELISA, kỹ thuật khuếch tán trên thạch...
Phản ứng Real time RT-PCR
Phản ứng Real Time RT - PCR là một kỹ thuật PCR sử dụng các đặc điểm của quá trình sao chép DNA. Real Time RT - PCR cho phép phát hiện và định lượng sự tích lũy DNA khuếch đại ngay khi phản ứng đang xảy ra. Khả năng này được phát hiện nhờ bổ sung vào phản ứng những phân tử phát huỳnh quang. Hóa
chất phát huỳnh quang bao gồm thuốc nhuộm liên kết DNA và những trình tự gắn huỳnh quang liên kết đặc hiệu với primer gọi là probe. Khi DNA tương hợp với primer thì quá trình sao chép sẽ xảy ra và sự gia tăng lượng tín hiệu huỳnh quang tỷ lệ với sự gia tăng lượng DNA. Khi sử dụng máy Bio - Rad, máy có bộ phận camera có thể chụp được tín hiệu huỳnh quang khi quá trình khuếch đại xảy ra. Ban đầu, tín hiệu huỳnh quang còn ở tín hiệu nền ta không thể phát hiện sự gia tăng tín hiệu cho dù có quá trình khuếch đại và sản phẩm đã tăng theo hàm mũ. Đến một thời điểm xác định, sản phẩm khuếch đại đã tạo ra đủ tín hiệu huỳnh quang có thể phát hiện được. Chu kỳ này được gọi là chu kỳ ngưỡng Ct
(cycle of threshold). Đây là giá trị để đánh giá kết quả phản ứng.
Cúm gia cầm type A có vật chất di truyền là RNA nên trong phản ứng RT - PCR có thêm quá trình sao chép ngược từ RNA→DNA gọi là Reverse Transcription nên phương pháp này được gọi là Real Time RT - PCR.
+ Nguyên lí hoạt động của probe:
Có nhiều loại hóa chất phát huỳnh quang dựa trên primer và probe, hóa chất được sử dụng trong phản ứng Real Time RT - PCR là Taqman probe.
Taqman probe được sử dụng như một trình tự oligonucleotide đặc hiệu, gắn chất huỳnh quang gọi là mẫu dò Taqman probe, cùng với các primer.
Trong giai đoạn kết hợp bắt gặp và kéo dài DNA trong phản ứng khuếch đại, probe liên kết với trình tự đích và hoạt động 5’ - 3’ exonuclease đặc hiệu cho DNA mạch đôi của Taq sẽ cắt đứt đầu gắn chất huỳnh quang. Kết quả chất huỳnh quang bị tách khỏi chất hấp phụ và tín hiệu huỳnh quang phát ra tỷ lệ với lượng sản phẩm khuếch đại trong mẫu.
2.6. PHÒNG BỆNH
Cúm gia cầm H5N1, H7N9 đang có dấu hiệu phát triển nhanh ở các nước láng giềng (Trung Quốc, Campudia..). Việt Nam đã có một số địa phương xuất hiện cúm A (H5N1). Các biện pháp phòng bệnh bao gồm:
- Vệ sinh ăn uống.
- Không giết mổ gia cầm bệnh, gia cầm chết.
- Không bán chạy đàn gia cầm khi phát hiện có gia cầm bệnh, chết trong đàn. Thông báo ngay cho Thú y địa phương để được hướng dẫn xử lý đúng chuyên môn.
- Không mua gia cầm không rõ nguồn gốc, không ăn trứng, thịt gia cầm khi chưa nấu chín hoàn toàn.
- Nuôi gia cầm xa nơi ở và vệ sinh chuồng trại 1 lần/ tuần với vôi bột hoặc phun đung dịch thuốc sát trùng.
- Khi có các biểu hiện cúm như: sốt, ho, đau ngực, khó thở cần đến ngay cơ sở y tế để được tư vấn, khám, điều trị kịp thời.
- Những người thường xuyên tiếp xúc với gia cầm, đi du lịch những vùng có dịch Cúm gia cầm về phải áp dụng các biện pháp phòng bệnh, khai báo tình trạng sức khỏe cho cơ quan y tế địa phương để được theo dõi sức khỏe.
- Đặc biệt, một biện pháp đơn giản mà phòng bệnh hiệu quả là người dân cần rửa tay thường xuyên bằng xà phòng để hạn chế việc phơi nhiễm với các virus có trên gia cầm trong môi trường.
2.6.1. Phòng bệnh đối với vùng chưa có dịch xảy ra hoặc nguy cơ có dịch
Trong thời gian xảy ra dịch ở các địa phương khác thì các trại chăn nuôi gia cầm giống áp dụng các biện pháp an toàn sinh học nhằm ngăn cản mầm bệnh đưa vào. Dụng cụ chăn nuôi, xe chuyên chở, dụng cụ bảo hộ lao động và con người ra vào trại phải được vệ sinh, khử trùng. Thức ăn, nước uống, chất độn chuồng phải đảm bảo không chứa mầm bệnh.
Thành lập các chốt kiểm dịch tạm thời nhằm ngăn chặn việc dịch chuyển gia cầm, sản phẩm gia cầm từ các địa phương có dịch vào. Các phương tiện giao thông ra vào phải được tiêu độc.
Tăng cường kiểm tra, giám sát phát hiện bệnh và tiêu hủy tất cả gia cầm, sản phẩm gia cầm có nguồn gốc từ các địa phương đang có dịch. Đồng thời tiến hành tổ chức dập dịch nhanh chóng khi còn ở diện hẹp.
2.6.2. Khống chế dịch ở các địa phương đang có dịch xảy ra
Tiến hành chẩn đoán phát hiện bệnh một cách nhanh chóng và chính