Phần 2 Tổng quan tài liệu
2.7. Cơ sở phân loại virus LMLM, chẩn đoán bằng phản ứng elisa
ỨNG ELISA
2.7.1. Cơ sở phân loại vius LMLM
- Hiện nay, các type virus LMLM do hai nhà khoa học Pháp phát hiện được gọi là type A và type O, còn virus do hai nhà khoa học Đức phát hiện là type C. Vì thế, đến cuối năm 1962 chúng ta đã có 3 type là O, A, C. Vài năm sau, 3 type virus LMLM khác được phát hiện ở miền Nam Châu Phi và được đặt tên là SAT1, SAT2, SAT3. Tiếp theo, các phòng thí nghiệm virus LMLM của Anh thông báo đã phân lập được virus type thứ 7 ở nhiều nước châu Á và đặt tên là Asia1.
- Ngoài 7 type cơ bản, người ta đã thừa nhận có hơn 70 subtype của virus LMLM. Một số subtype về mặt miễn dịch học hoàn toàn khác với type bố mẹ và vì thế dùng vacxin chỉ hiệu quả khi virus dùng chế vacxin đồng nhất với virus gây bệnh cho gia súc trong ổ dịch.
- Các phương pháp phân loại virus LMLM: Thông thường, việc phân loại virus LMLM dựa vào kết quả chẩn đoán phân biệt các type virus LMLM thông qua các phản ứng trong phòng thí nghiệm. Có thể điểm qua các phương pháp giám định, phân biệt virus LMLM và kiến thức phân loại virus LMLM hiện nay như sau.
+ Phân lập virus LMLM
+ Các phương pháp miễn dịch học: • Giám định bằng bản động vật;
• Phương pháp miễn dịch gắn với enzyme (ELISA); • Phản ứng kết hợp bổ thể;
• Các phản ứng huyết thanh học khác;
• Giám định virus LMLM bằng các phương pháp hiện đại.
2.7.2. Phương pháp ELISA
Theo tác giả Tô Long Thành (2000), ELISA là một phản ứng dùng để chẩn đoán nhanh bệnh LMLM và để giám định type huyết thanh của virus. Phản ứng này có những thuận lợi hơn hẳn các phản ứng thông thường khác. Đây là một phản ứng có độ đặc hiệu cao khi dùng với một kháng thể đơn dòng, phản ứng cũng có độ nhạy cao trong chẩn đoán và định type virus (Have, 1987); (Hamblin
et al., 1987). Phản ứng ELISA cũng thường được sử dụng hơn so với phản ứng kết hợp bổ thể vì nó có độ đặc hiệu và độ nhạy cao hơn, không bị ảnh hưởng của các yếu tố tăng cường hoặc ức chế bổ thể (Nguyễn Đăng Khải và cs., 2000).
- Phương pháp này thực hiện cần nhất phải là có một bộ KIT ELISA kháng nguyên, một số dung dịch bổ trợ khác và máy đọc ELISA
- Kết quả chẩn đoán phụ thuộc vào một quá trình bao gồm: + Phương pháp lấy mẫu bệnh phẩm;
+ Bảo quản và bao gói bệnh phẩm; + Kỹ thuật xét nghiệm.
Nguyên lý: Dùng kháng thể hoặc kháng kháng thể gắn enzym, rồi cho kết hợp trực tiếp hoặc gián tiếp với kháng nguyên, sau đó cho cơ chất vào, cơ chất bị enzym phân huỷ tạo màu và khi so màu trong quang phổ kế sẽ định lượng được mức độ phản ứng.
Phân loại phản ứng ELISA: được phân thành 3 loại chính như sau
- Phản ứng ELISA trực tiếp (direct ELISA): dùng kháng thể gắn enzyme để xác định kháng nguyên nghi cố định trên đĩa chuyên dụng.
- Phản ứng ELISA gián tiếp (indirect ELISA): dùng kháng nguyên chuẩn và kháng kháng thể gắn enzyme để phát hiện kháng thể nghi.
- Phản ứng Sandwich ELISA gồm 2 loại:
+ Phản ứng Sandwich ELISA trực tiếp (direct Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn được kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể gắn enzyme;
+ Phản ứng Sandwich ELISA gián tiếp (indirect Sandwich ELISA): kháng nguyên chuẩn được kẹp giữa kháng thể chuẩn và kháng thể nghi, sau đó kháng thể nghi được nhận diện bằng kháng thể loài gắn enzyme.
Ứng dụng phản ứng ELISA trong chẩn đoán bệnh LMLM:
Phản ứng ELISA phát hiện kháng nguyên virus LMLM:
Phương pháp ELISA thường được sử dụng để xác định sự có mặt của kháng nguyên virus LMLM trong mẫu bệnh phẩm lấy từ gia súc bị nghi ngờ nhiễm virus. Nếu mẫu được lấy từ nơi chứa ít virus hay chất lượng mấu không đảm bảo thì trước khi định type virus bằng phương pháp ELISA sẽ tiến hành nuôi cấy trên
Phản ứng ELISA phát hiện kháng thể kháng virus LMLM
+ Phương pháp ELISA cũng được sử dụng để phát hiện và giám định các serotype của virus LMLM trong huyết thanh gia súc. Trong phản ứng, mỗi đĩa ELISA chỉ làm với một type virus LMLM chuẩn, để phát hiện kháng thể nghi trong huyết thanh của gia súc cần chẩn đoán.
+ Có thể sử dụng cả ba phương pháp ELISA để phát hiện kháng thể kháng virus LMLM. Nhưng hiện nay phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp thường được sử dụng phổ biến hơn cả. Kỹ thuật ELISA này có thuận lợi hơn hẳn các phản ứng thông thường khác do có tính đặc hiệu rất cao, rất nhạy lại kinh tế vì nhiều ứng dụng.
+ Trong chẩn đoán phát hiện bệnh, với phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp chúng ta có thể phát hiện và định type kháng nguyên virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm biểu mô, dịch tiết hay có thể phát hiện kháng thể và giám định serotype virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm huyết thanh.
+ Đối với gia súc đã tiêm phòng vacxin, để đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch người ta cũng sử dụng phương pháp Sandwich ELISA gián tiếp để định lượng kháng thể kháng virus LMLM.