Sắc ký lớp mỏng hay còn gọi là sắc ký phẳng là kỹ thuật phân bố rắn- lỏng. Đây là một phương pháp hiện đại, được sử dụng rỗng rãi trong các ngành hóa học, hóa sinh, hóa dược… Với các mục đích khác nhau để tách các cấu tử vô cơ hoặc hữu cơ với độ nhạy cao, lượng mẫu phân tích nhỏ, thời gian phân tích ngắn,khả năng phân tách tốt, kỹ thuật tiến hành đơn giản và chi phí thấp. Phương pháp TLC có thể để dùng định tính hay định lượng hoặc để kiểm tra độ tinh khiết của các hợp chất cũng như hỗ trợ cho các phương pháp sắc ký khác như sắc ký cột để tìm hệ dung môi thích hợp cho sự phân tách.
Trong phương pháp sắc ký lớp mỏng thì pha động là chất lỏng được đi xuyên qua (pha tĩnh) một lớp chất hấp thụ trơ như: silicagen hoặc nhôm oxit, chất hấp thụ này được tráng thành một lớp mỏng, đều phủ lên một nền phẳng như tấm kính, tấm nhôm, hoặc tấm plastic. Hiện nay có thể dùng các bản mỏng tráng sẵn lớp chất hấp thụ được bán trên thị trường như bản mỏng silica gel tráng sẵn DC-Alufolien 60 F254 (Merck) trên nền nhôm.
Quan sát phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254nm và 368nm. Hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% được nhúng đều lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ từ đến khi hiện màu, quan sát vệt chất.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
2.1.2.2. Sắc ký lớp mỏng điều chế (Preparative thin layer chromatography – PTLC)
Sắc ký lớp mỏng điều chế là một phương pháp sắc ký được sử dụng để tách một lượng nhỏ đơn chất (10 – 1000 mg) từ một hỗn hợp đơn giản (chỉ gồm vài cấu tử). Trong PTLC, một dung dịch mẫu thử được chấm trên một lớp chất hấp phụ (thường là silica gel, nhôm oxyd) có độ dày từ 0,5 – 2,0 mm tráng trên nền phẳng (kính, kim loại, chất dẻo) đóng vai trò là một pha tĩnh. Một dung môi khai triển (pha động) di chuyển dọc theo bản mỏng sẽ làm di chuyển các cấu tử của mẫu thử theo một vận tốc khác nhau tạo thành một sắc ký đồ gồm nhiều vết có Rf khác nhau. Sau khi khai triển, ta có thể thu được những cấu tử đặc trưng bằng cách cạo vùng chất hấp phụ chứa vết ra khỏi bản và phản hấp phụ chất ra khỏi giá hấp phụ bằng một dung môi thích hợp. Hợp chất thu được từ bản mỏng có thể được tinh khiết hóa tiếp tục bằng sắc ký lớp mỏng hay các phương pháp sắc ký khác hoặc hợp chất này đã đạt độ tinh khiết để tiến hành định tính, xác định cấu trúc bằng các phương pháp phân tích cơ bản hay bằng phép đo quang phổ, nghiên cứu hoạt tính sinh học, nghiên cứu tổng hợp hóa học, sử dụng như chất chuẩn đối chiếu.
Phương pháp tiến hành của PTLC nhìn chung tương tự như TLC chỉ khác ở việc sử dụng những bản mỏng dày hơn so với TLC: PTLC 0,5 – 2 mm, có thể dày đến 10 mm tùy yêu cầu sử dụng; TLC 0,2 – 0,25 mm.
Với phương pháp này thì các hợp chất kém bền chấm trên bề mặt bản mỏng có thể bị phân hủy khi tiếp xúc với không khí và ánh sáng. Sự hiện diện đồng thời của tạp chất khi phản hấp phụ chất mong muốn ra khỏi giá hấp phụ. Dung môi sử dụng trong phương pháp PTLC thường là loại dung môi có độ tinh khiết cao, tránh chứa các vết kim loại, không quá dễ bay hơi.
Các bản mỏng chế hóa có thể tự làm trong phòng thí nghiệm (bản mỏng tự tráng) hoặc sử dụng những bản mỏng tráng sẵn. Dùng các chất hấp phụ tạo hỗn dịch bền trong nước (có thể thêm một lượng nhỏ chất trơ như thạch cao để kết dính nếu cần) rồi tráng lên tấm kính phẳng thành các bản có độ dày 0,5
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/
– 2,0 mm (có thể dày đến 10 mm) tùy yêu cầu sử dụng. Để khô bản ở nhiệt độ phòng trong 2 ngày, sau đó sấy sơ bộ 600
C trong 2h rồi mới sấy hoạt hóa ở 1200C trong 2h.
Chuẩn bị mẫu thử (đã được sơ bộ loại tạp) được cô ở áp suất giảm đến khô, sau đó hòa vào trong một lượng vừa đủ dung môi (phải hòa tan tốt mẫu thử và dễ bay hơi) rồi chấm lên bản mỏng. Đánh dấu đường xuất phát cách mép dưới 1 – 2 cm.
Cách phát hiện trong sắc ký lớp mỏng điều chế: soi UV, phun thuốc thử lên phần không bị che, sử dụng hơi iod.