❖ Chất chuẩn:
- Có thể dùng chuẩn gốc hoặc chuẩn thứ cấp ❖ Đơn vị hoạt lực (IU)
- Là hoạt lực đặc trưng của một lượng nhất định chất kháng sinh chuẩn sinh học quốc tế hoặc chế phẩm đối chiếu sinh học với chuẩn quốc tế
- Có thể được thể hiện bằng µg hoạt lực ❖ Các pp vsv định lượng KS
- Phương pháp đo độ đục (turbidimetric method):
53
Phương pháp khuếch tán Nguyên tắc:
- Kháng sinh khuếch tán vào môi trường đặc đã cấy VSV chỉ thị tạo vùng ức chế VSV có đường kính tỷ lệ thuận với logarith nồng độ tương ứng.
- Hoạt lực của chất thử được so sánh với chất chuẩn theo phương pháp thống kê
Pha dd chuẩn và dd thử:
- Cân chất chuẩn, hòa tan vào dung môi để có nồng độ khoảng 1000 UI, pha thành 2-3 nồng độ cuối cùng s1<s2<s3 theo cấp số nhân
- Pha chất thử cách tương tự để được t1<t2<t3
- Kết quả tốt khi chất chuẩn và chất thử có cùng bản chất hóa học - Không so sánh KS ở 2 dạng muối khác nhau
- Nồng độ cuối cùng không thích hợp hoặc hoạt lực của thử khác quá xa chuẩn sẽ gây sai số lớn
Tiến hành thử nghiệm
- Đổ thạch có chủng chỉ thị vào đĩa petri để được bề dày 2-5 mm (vK không bào tử: nhiệt độ < 45 oC, có bào tử: < 65 – 70 oC)
- Môi trường được để khô ở nhiệt độ phòng 30 phút
- Nếu thử 3 liều: dùng 6 ống trụ (L = 10 cm, id = 6 mm) để cho mẫu lên thạch. Có thể đục lỗ hoặc dùng giấy tròn có tẩm kháng sinh
- Để đĩa ở nhiệt độ phòng hay ở 4 oC trong 1-4 h trước khi ủ - Đo đường kính vùng ức chế với độ chính xác ít nhất 0.1 mm - Một thí nghiệm làm trên 10 đĩa thử song song
- Tính kết quả
Mô hình thống kê đường thẳng song song:
Điều kiện áp dụng mô hình thống kê đường thẳng song song (5 điều kiện):
- Các xử lý khác nhau của chế phẩm chuẩn và chế phẩm cần định lượng đã được phân bố ngẫu nhiên cho từng đơn vị thí nghiệm (đạt nếu thực hiện đúng theo hướng dẫn của DĐ)
- Các đáp ứng của mỗi xử lý tuân theo phân phối chuẩn (xem như đều đạt)
- Độ lệch chuẩn của các đáp ứng trong mỗi nhóm xử lý của cả chế phẩm chuẩn và chế phẩm cần định lượng không khác nhau có ý nghĩa.(có thể được kiếm tra bằng phép thử tính đồng nhất của các
54
phương sai, ví dụ bằng phép kiểm Bartlett hoặc phép kiểm Hartley (xem các ví dụ trong mục 3.2.8, phụ lục 13.10, DĐVN V)
- Đường biểu diễn mối quan hệ giữa logarit liều và đáp ứng phải tuyến tính trong khoảng liều đã dùng.
- Đường thẳng ln(liều) - đáp ứng của chế phẩm cần định lượng phải song song với đường In(liều) - đáp ứng của chế phẩm chuẩn.
BUỔI 8-9-10. KIẾM NGHIỆM CÁC DẠNG BÀO CHẾ